[发明专利]一种小细胞肺癌患者外周血循环肿瘤细胞及PD-L1的检测试剂盒

说明书

本发明涉及一种小细胞肺癌患者外周血循环肿瘤细胞及PD‑L1的检测试剂盒，属于外周血循环肿瘤细胞检测试剂技术领域。本发明用于循环肿瘤细胞检测的试剂包括CTC检测一抗混合物和CTC检测二抗混合物：所述CTC检测一抗混合物包含：Anti‑Cytokeratin、anti‑CD45、anti‑pan角蛋白、anti‑EpCAM和皮尔斯免疫增强剂；所述CTC检测二抗混合物包含：羊抗小鼠AlexaFluor 488、羊抗兔AlexaFluor 647、DAPI工作液和皮尔斯免疫增强剂本发明所述试剂能够大大提高检测效率，降低检测成本，提高检测特异性及准确性。

技术领域

本发明涉及外周血循环肿瘤细胞检测试剂技术领域，具体涉及一种小细胞肺癌患者外周血循环肿瘤细胞及PD-L1的检测试剂盒。

背景技术

PD-L1(B7-H1)属于B7家族，具有IgV和IgC样区、跨膜区及胞浆区尾部，PD-L1与其T细胞上的受体PD-1相互作用，在免疫应答的负性调控方面发挥着重要作用；该分子具有广泛的组织表达谱，在一些肿瘤细胞系上有较高的表达，许多研究均表明其与肿瘤的免疲逃逸机制相关。肿瘤部位的微环境可诱导肿瘤细胞上的PD-L1的表达，且表达广泛，表达的PD-L1有利于肿瘤的发生和生长，诱导抗肿瘤T细胞的凋亡。转染PD-L1基因的P815肿瘤细胞系在体外可抵制特异性CTL的裂解，将其接种小鼠体内后具有更强的致瘤性和侵袭性。这些生物学特性均可通过阻断PD-L1而逆转。敲除PD-1基因的小鼠，阻断PD-L1/PD-1通路，则接种肿瘤细胞不能形成肿瘤。

在许多人类肿瘤组织中均可检测到PD-L1蛋白的表达，且许多癌组织较正常组织中的PD-L1表达水平明显上调。应用免疫组化学方法，已先后在乳腺癌、肺癌、胃癌、肠癌、食管癌、卵巢癌、宫颈癌、肾癌、膀胱癌、胰腺癌、神经胶质瘤、黑色素瘤等人类肿瘤组织中检测到PD-L1蛋白的表达，且PD-L1的表达水平和患者的临床及预后紧密相关。该方法被认为是PD-Ll检测的金标准，但对于部分缺乏手术指证或存在手术禁忌症的非小细胞肺癌患者，由于肿瘤组织无法切除，细针穿刺组织又容易造成肿瘤播散，PD-Ll状态评估变得困难。另外，对于非小细胞肺癌转移、复发早期的患者，由于无法获得肿瘤组织样本，更加无法判断PD-Ll状态。

发明内容

本发明的目的在于提供一种小细胞肺癌患者外周血循环肿瘤细胞及PD-L1的检测试剂盒。本发明所述试剂能够大大提高检测效率，降低检测成本，提高检测特异性及准确性。

本发明提供了用于循环肿瘤细胞检测的试剂，所述试剂包括CTC检测一抗混合物和CTC检测二抗混合物：

所述CTC检测一抗混合物包含：Anti-Cytokeratin、anti-CD45、anti-pan角蛋白、anti-EpCAM和皮尔斯免疫增强剂；

所述CTC检测二抗混合物包含：羊抗小鼠AlexaFluor 488、羊抗兔AlexaFluor647、DAPI工作液和皮尔斯免疫增强剂。

优选的是，所述CTC检测一抗混合物包含质量百分含量为：0.2％的Anti-Cytokeratin，0.5％的anti-CD45、0.2％的anti-pan角蛋白、0.1％的anti-EpCAM和皮尔斯免疫增强剂。

优选的是，所述CTC检测二抗混合物包含质量百分含量为：0.1％的羊抗小鼠AlexaFluor 488、0.2％的羊抗兔AlexaFluor 647、0.5％的DAPI工作液和皮尔斯免疫增强剂。

本发明还提供了用于循环肿瘤细胞上PD-L1检测的试剂，所述试剂包括PD-LI检测一抗混合物和PD-LI检测二抗混合物：

所述PD-LI检测一抗混合物包含：Anti-Cytokeratin、anti-CD45、anti-pan角蛋白、anti-EpCAM、anti-CD274和皮尔斯免疫增强剂；