[发明专利]γ-聚谷氨酸的生物发酵方法及其应用

权利要求书

1.一种γ-聚谷氨酸的生物发酵方法，其特征在于，包括使用枯草芽孢杆菌和纳豆芽孢杆菌发酵生产γ-聚谷氨酸；

枯草芽孢杆菌和纳豆芽孢杆菌的活菌量比为1：(1～3)。

2.根据权利要求1所述的生物发酵方法，其特征在于，枯草芽孢杆菌和纳豆芽孢杆菌的活菌量比为1：(1～2)。

3.根据权利要求2所述的生物发酵方法，其特征在于，枯草芽孢杆菌和纳豆芽孢杆菌的活菌量比为1：2。

4.根据权利要求1-3任一项所述的生物发酵方法，其特征在于，枯草芽孢杆菌的种子液和纳豆芽孢杆菌的种子液分别独立的按照如下方法制备：将单菌落接种于菌种活化培养基中，培养15～16h后转移至种子液培养基中培养至对数生长期；

优选地，种子液培养基中培养转速140～160rpm，培养18～22h至对数生长期；

优选地，所述种子液培养基包括葡萄糖18～22g/L、酵母膏4.5～5.5g/L、K₂HPO₄ 1.5～2.5g/L、MgSO₄ 0.2～0.3g/L和谷氨酸钠9.5～10.5g/L；

优选地，种子液培养基的pH优选6.5～7.5。

5.根据权利要求1-3任一项所述的生物发酵方法，其特征在于，发酵包括将枯草芽孢杆菌的种子液和纳豆芽孢杆菌的种子液按照配方量接种于发酵培养基中，发酵12～16h后添加流加培养基，使发酵培养基中的葡萄糖含量的终浓度维持0.15～0.25％m/v；

优选地，枯草芽孢杆菌的种子液和纳豆芽孢杆菌的种子液接种的总量为发酵培养基的8～10％v/v；

优选地，发酵条件为：发酵培养基占发酵容器体积的50～70％，转速320～360rpm，发酵容器压力0.02～0.04Mpa，总发酵时间为75～85h；

优选地，所述发酵培养基包括：葡萄糖35～45g/L、酵母膏8～10g/L、K₂HPO₄·3H₂O 1.5～2.5g/L、MgSO₄ 0.2～0.3g/L和谷氨酸钠35～45g/L；所述发酵培养基的pH优选7.0～8.0；

优选地，所述流加培养基包括：葡萄糖65～75g/L，酵母膏15～25g/L、K₂HPO₄·3H₂O 3.5～4.5g/L、MgSO₄ 0.4～0.6g/L和谷氨酸钠65～75g/L。

6.根据权利要求1-3任一项所述的生物发酵方法，其特征在于，所述生物发酵方法还包括在发酵后对发酵液酸化；

优选地，所述酸化包括将发酵液的pH调节至3～4，优选调节至3.5。

7.根据权利要求1-3任一项所述的生物发酵方法，其特征在于，发酵后分离发酵液中的菌体，保留发酵清液；然后浓缩所述发酵清液，得到γ-聚谷氨酸浓缩液；γ-聚谷氨酸浓缩液经纯化处理得到γ-聚谷氨酸；

优选地，所述分离发酵液中的菌体包括将发酵液离心后沉淀18～22h，经滤膜过滤得到所述发酵清液。

8.根据权利要求7所述的生物发酵方法，其特征在于，将所述发酵清液浓缩至原体积的25～35％，得到所述γ-聚谷氨酸浓缩液；优选将所述发酵清液浓缩至原体积的30％；

优选地，调节γ-聚谷氨酸浓缩液pH至6～7，优选调节至6；

优选地，采用超滤膜浓缩发酵清液，所述超滤膜优选采用超滤膜6000。

9.根据权利要求7所述的生物发酵方法，其特征在于，所述纯化处理包括使用C1～C4的低碳醇沉淀所述γ-聚谷氨酸浓缩液中的γ-聚谷氨酸；

优选地，C1～C4的低碳醇优选包括乙醇；

优选地，所述γ-聚谷氨酸浓缩液和乙醇的体积比为1：(1～2)；优选1：1.5；

优选地，至少使用C1～C4的低碳醇沉淀γ-聚谷氨酸两次。

10.权利要求1-9任一项所述的γ-聚谷氨酸的生物发酵方法在制备化妆品中的应用。