[发明专利]一种利用酶标仪快速测定烟草中葡萄糖含量的方法

权利要求书

1.一种利用酶标仪快速测定烟草中葡萄糖含量的方法，具体采用以下步骤：

(1)样品前处理：

将烟草或烟草制品置于烘箱中，40℃烘干至可用手指捻碎，取出用粉碎机研磨，过40目筛后得到烟末样品，取0.1g烟末样品于三角瓶中，加20mL水萃取样品中的葡萄糖，振荡30min后过滤得到滤液，作为待测样品溶液备用；

(2)绘制标准工作曲线：

准确配制浓度为5.55mmol/L的葡萄糖标液，分别移取该葡萄糖标液5、25、50、75、100和150μL置于2mL微量离心管中，在每个离心管中分别加入葡萄糖氧化酶-过氧化物酶试剂盒(以下简称：试剂盒)中的试剂R₁和R₂各1000μL混匀，于37℃水浴显色15min后分别转移至96孔酶标板的不同位置，得到葡萄糖浓度分别为0.014、0.069、0.135、0.201、0.264、0.387mmol/L的标准工作液，以溶液的葡萄糖浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，得到标准工作曲线方程：y＝2.941x+0.059，相关系数r²＝0.996；

(3)分析方法：

取待测样品溶液100μL置于2mL微量离心管中，分别加入试剂盒中的试剂R₁和R₂各1000μL混匀，于37℃水浴显色15min，转移至96孔酶标板中，以蒸馏水分析液为参比，用酶标仪于波长505nm处测定吸光度，由标准工作曲线推算出待测样品溶液的葡萄糖浓度；

(4)结果计算：

将待测样品溶液的葡萄糖浓度值代入公式(1)，计算待测样品的葡萄糖含量，并以两次平行测定的平均值作为最终的测定结果；

P—待测样品中的葡萄糖含量，单位为百分比(％)；

C_待测—待测样品溶液的葡萄糖浓度，单位为毫摩尔每升(mmol/L)；

V_R1—试剂盒R₁试剂的加入体积，单位为毫升(mL)；

V_R2—试剂盒R₂试剂的加入体积，单位为毫升(mL)；

V_样品—待测样品溶液的加入体积，单位为毫升(mL)；

V_萃取—样品萃取剂的体积，单位为毫升(mL)；

0.18016—葡萄糖的物质的量，单位为克每毫摩尔(g/mmol)；

m—待测样品质量，单位为克(g)；

w—待测样品水份含量，单位为百分比(％)。