[发明专利]补肾助孕颗粒指纹图谱的检测方法

权利要求书

1.一种补肾助孕颗粒指纹图谱的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1，补肾助孕颗粒供试品溶液的制备：

分别精密称取不同批次的补肾助孕颗粒，研细，精密称定，置于具塞锥形瓶中，加入甲醇水溶液，超声处理，滤过，取续滤液，即得；

步骤2，混合对照品溶液的制备：

分别精密称取没食子酸、5-羟甲基糠醛、莫诺苷、马钱苷、当药苷、芍药苷、金丝桃苷、紫云英苷、迷迭香酸和丹酚酸B对照品，加甲醇制成混合对照品溶液；

步骤3，分别精密吸取步骤1供试品溶液和步骤2混合对照品溶液，注入高效液相色谱仪分析，记录色谱图；

步骤4，将步骤3中获得的补肾助孕颗粒供试品溶液的指纹图谱导出，并导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A；选择不同批次补肾助孕颗粒的色谱图中均存在的色谱峰作为共有峰；用平均值计算法生成补肾助孕颗粒的对照指纹图谱，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积；并根据混合对照品溶液色谱图的保留时间标注对照指纹图谱中峰的化学成分；

步骤3中高效液相色谱条件为：色谱柱为：Hedera ODS-2 C18色谱柱，规格250 mm×4.6mm，5 μm，以乙腈为流动相A，以0.2%磷酸水溶液为流动相B，梯度洗脱，流速1.0 mL·min^-1，检测波长237 nm，柱温30 ℃，进样量10 μL；

梯度洗脱程序为：0~15 min，5%A→7%A；15~30 min，7%A→9.5%A；30~31 min，9.5%A→11%A；31~55 min，11%A；55~65 min，11%A→20%A；65~95 min，20%A→22%A；95~100 min，22%A→5%A。

2.一种补肾助孕颗粒指纹图谱的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1，补肾助孕颗粒供试品溶液的制备：

分别精密称取不同批次的补肾助孕颗粒，研细，精密称定，置于具塞锥形瓶中，加入甲醇水溶液，超声处理，滤过，取续滤液，即得；

步骤2，混合对照品溶液的制备：

分别精密称取没食子酸、5-羟甲基糠醛、莫诺苷、马钱苷、当药苷、芍药苷、金丝桃苷、紫云英苷、迷迭香酸和丹酚酸B对照品，加甲醇制成混合对照品溶液；

步骤3，缺失药材的阴性样品溶液的制备

分别取缺失酒萸肉、菟丝子、丹参、炒白芍或酒萸肉-炒白芍药材的补肾助孕颗粒，研细，精密称定，置于具塞锥形瓶中，加入甲醇水溶液，超声处理，滤过，取续滤液，即得缺失各药材的阴性样品溶液；

步骤4，分别精密吸取步骤1供试品溶液，步骤2混合对照品溶液和步骤3缺失药材的阴性样品溶液，注入高效液相色谱仪分析，记录色谱图；

步骤5，将步骤4中获得的各批次的补肾助孕颗粒供试品溶液的指纹图谱导出，并导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A；选择各批次补肾助孕颗粒的色谱图中均存在的色谱峰作为共有峰；用平均值计算法生成补肾助孕颗粒的对照指纹图谱，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积；并根据混合对照品溶液色谱图的保留时间标注对照指纹图谱中峰的化学成分；

并将对照指纹图谱与缺失药材的阴性样品溶液的色谱图进行比较，指认出对照指纹图谱中共有峰与药材的相关性；

步骤4中高效液相色谱条件为：色谱柱为：Hedera ODS-2 C18色谱柱，规格250 mm×4.6mm，5 μm，以乙腈为流动相A，以0.2%磷酸水溶液为流动相B，梯度洗脱，流速1.0 mL·min^-1，检测波长237 nm，柱温30 ℃，进样量10 μL；

梯度洗脱程序为：0~15 min，5%A→7%A；15~30 min，7%A→9.5%A；30~31 min，9.5%A→11%A；31~55 min，11%A；55~65 min，11%A→20%A；65~95 min，20%A→22%A；95~100 min，22%A→5%A。