[发明专利]Sirpa蛋白亲和环肽及其应用

说明书

本发明涉及Sirpɑ胞外段亲和环肽及其应用。亲和环肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1‑6所示。本发明还提供了含所述环肽的药物组合物或试剂盒。本发明的亲和环肽能够亲和Sirpɑ胞外段，阻断Sirpɑ与CD47之间的相互作用，进而起到抗肿瘤效果。

技术领域：

本发明属于生物技术制药领域，具体涉及Sirpɑ蛋白亲和环肽及其应用。

背景技术：

一直以来，肿瘤以其不断增高的致死率和发病率成为不断威胁人类生命健康的重大严重疾病之一，人们不断探寻治疗肿瘤的方法。传统医治肿瘤的措施包括化学治疗、放射治疗和外科治疗，虽然这些方法在临床上已经运用数年，但是它们局限性而且对人体的副作用比较大。目前肿瘤治疗领域最受关注的是免疫治疗，肿瘤免疫治疗是激发机体自身的免疫机制，通过改善自身免疫能力对肿瘤细胞进行杀伤，达到抗肿瘤的目的。2013年《科学》杂志把肿瘤的免疫治疗列为十大科学突破之首，肿瘤免疫治疗法逐步成为继三大传统治疗方法之后的第四种重要疗法。肿瘤的免疫治疗是科学界的一大热点，2018年诺贝尔生理学或医学奖也授予这一领域的两位免疫学家，以表彰他们“发现负性免疫调节治疗癌症的疗法方面的贡献”。

肿瘤细胞通过上调免疫检查点，使其与相应配体结合，产生负性调控信号从而抑制吞噬细胞、T细胞等免疫细胞对肿瘤细胞的威胁而发生免疫逃逸。在肿瘤免疫逃逸的机制中，高表达免疫抑制信号这一机制近年来受到越来越多的关注。随着先天免疫检查点PD-1和CTLA-4的抗体在临床上的使用，CD47正在成为免疫检查点治疗的下一个主要目标，受到科研人员广泛的关注。

CD47是一种广泛表达在体内多种细胞表面的跨膜糖蛋白，尤其表达在T细胞、红细胞等造血细胞上，是免疫球蛋白超家族的成员之一。CD47不仅可以参与中性粒细胞的增殖、粘附、迁移、凋亡和吞噬作用，而且也可以在免疫调节、体内平衡和神经系统中发挥重要调节功能。此外，CD47还可以介导血管平滑肌细胞的增殖和迁移、血小板的活化和扩散以及粒细胞和T细胞向感染部位的募集。最重要的是，CD47可以在生物体内的宿主细胞上起到“自身”标记的作用，当被激活时，CD47启动信号转导级联反应，与循环免疫细胞如巨噬细胞表面上的SIRP-α结合，发出“不要吃我”的免疫负性调控信号,抑制巨噬细胞对自身细胞的识别和吞噬，减少自身免疫疾病的发生。例如，表达在红细胞膜上的CD47可以使年幼的红细胞避免被吞噬细胞发现，从而继续行使运输氧气的作用，然而随着红细胞的不断成熟，其表面上的CD47表达量逐渐降低，衰老的红细胞就可以及时有效地得到清除。

目前的研究发现，几乎所有的肿瘤细胞表面都会高表达CD47，通过CD47与SIRP-α结合后产生的抑制性信号通路来逃避免疫细胞对它们的吞噬作用，并且肿瘤细胞上CD47的高表达也与不良预后有关。病理学上的研究结果表面，CD47在多种造血系统肿瘤中包括B细胞非霍奇金淋巴瘤细胞、急性淋巴细胞白血病干细胞、慢性粒细胞白血病细胞、急性髓细胞白血病干细胞等多种肿瘤细胞表面的表达量都显著高于正常细胞表面的表达量，通过它和SIRP-α结合后发出“不要吃我”的负性调控信号，导致肿瘤细胞逃避免疫系统的监视和攻击，从而抑制吞噬作用和T细胞活化作用，这也表明了肿瘤细胞会通过高表达免疫检查点相关的蛋白量来进行免疫逃逸。因此在CD47/SIRP-α通路的基础上，寻找合理有效的治疗策略也是科学家们正在面临和亟待解决的问题。

目前针对CD47/SIRP-α通路的单克隆抗体已经上市，应用于肿瘤的免疫治疗，但抗体类药物生产成本高、组织渗透性差、半衰期长，不能很快终止免疫不良事件，而多肽等小分子药物合成方便、组织渗透性好、免疫原性也较低。

发明内容：

本发明独辟蹊径，提供了一种Sirpɑ蛋白胞外段亲和环肽，并经过实验证明了该亲和环肽对Sirpɑ蛋白胞外段的体外亲和力强，可阻断Sirpɑ/CD47蛋白结合，故而具有抗肿瘤活性。

第一方面，本发明提供了一种环肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1-6所示。所述环肽的各氨基酸的构型可独立地选自D型或L型，比如各氨基酸的构型均为D型或L型。