[发明专利]苯并芘DNA加合物四种立体异构体的制备及纯化方法

权利要求书

1.anti-BPDE-N²-dG四种立体异构体的制备及纯化方法，其特征在于，

1）合成anti-BPDE-N²-dG

称取0.1 mg (±)anti-BPDE溶于100 μL的四氢呋喃：三乙胺=19:1的溶液中；称取4.8mg的2'脱氧鸟苷溶于1.2 mL 50 mmol/L Tris-HCl，pH=7.5缓冲溶液中，将两者混匀，避光，23.6℃室温反应48小时；

2）固相萃取初步纯化

欲从反应液中提取出目标产物anti-BPDE-N²-dG，需要固相萃取进行初步纯化与富集，去除反应基底溶液；称取100 mg Si-C₁₈吸附剂，甲醇活化并装入固相萃取小柱，5 mL水替换甲醇，将反应液通过活化的固相萃取小柱，再分别依次用2 mL的超纯水，1 mL 10%甲醇水溶液，1 mL 30%甲醇水溶液淋洗，抽干小柱，最后用2 mL甲醇洗脱小柱，收集洗脱液并浓缩：室温挥发至1 mL；

3）高效液相色谱纯化

合成的产物经固相萃取这种样品前处理方式不能去除合成副产物四醇-BaP的干扰，需经HPLC进一步纯化，紫外检测波长为345 nm；

使用五氟苯色谱柱250 mm × 4.6 mm, 5 μm，流动相各成分体积比为：乙腈/0.1%甲酸水溶液=22.5:77.5，v:v，流速1.2 mL/min，45分钟内可将4种BPDE-N²-dG立体异构体与两种四醇-BaP副产物完全分离开，分别收集anti-BPDE-N²-dG四种立体异构体，即保留时间为22.887 min，28.090 min，30.430 min，33.763 min的流出物并冷冻干燥去除溶剂；所述的anti-BPDE-N²-dG四种立体异构体的结构式分别为：

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