[发明专利]一种采用酶催化法制备糖苷的方法

权利要求书

1.一种采用酶催化法制备糖苷的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)酶催化底物的精制：将亚硫酸钠、工业级酶催化底物、活性炭、维生素C以及水按质量比亚硫酸钠：工业级酶催化底物：活性炭：维生素C：水为1：500～1000：10～50：5～10：1000～1500混合均匀，在50～80℃溶解，趁热过滤，然后结晶过滤后在40～60℃真空干燥4～10h；其中，工业级酶催化底物为工业级对苯二酚或工业级维生素C；

(2)糖苷酶催化水解：将蔗糖溶于水中配成50～200mmol/L溶液，加入抗氧剂维生素C，待溶解完全后，加入精制过的酶催化底物和蔗糖糖苷转移酶，在30～40℃下于pH为5.0～8.0的条件下避光反应20～80h；用正丁醇萃取，浓缩得到糖苷粗产物；其中蔗糖糖苷转移酶：蔗糖：抗氧剂维生素C：精制过的酶催化底物的物质的量比为1：100～500：1～5：10～80；

(3)将步骤(2)得到的糖苷粗产物在水中重结晶3～5次得到纯度在98％以上的α-熊果苷或维生素C葡萄糖苷纯品。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的蔗糖糖苷转移酶的基因序列为SEQID No.1所示基因序列，或其基因序列与SEQ ID No.1所示的基因序列具备95％以上的同源性且能使对苯二酚与蔗糖反应生成α-熊果苷或使维生素C与蔗糖反应生成维生素C葡萄糖苷的酶的基因序列。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的蔗糖糖苷转移酶的氨基酸序列为SEQ ID No.2所示，或其氨基酸序列与SEQ ID No.2所示的氨基酸序列具备98％以上的同源性且能使对苯二酚与蔗糖反应生成α-熊果苷或使维生素C与蔗糖反应生成维生素C葡萄糖苷的酶。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的蔗糖糖苷转移酶的生产细胞选自基因工程改造的酵母菌或大肠杆菌。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，制备α-熊果苷时，步骤(1)中，亚硫酸钠、工业级对苯二酚、活性炭、维生素C以及水的质量比为0.2：100：5：1：250。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，制备α-熊果苷时，步骤(2)中，将蔗糖溶于水中配成100mmol/L溶液，蔗糖糖苷转移酶：蔗糖：抗氧剂维生素C：精制过的酶催化底物对苯二酚的物质的量比为1：100：1：10。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，制备维生素C葡萄糖苷时，步骤(1)中，亚硫酸钠、工业级维生素C、活性炭、维生素C以及水的质量比为0.2：100：5：1：250。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，制备维生素C葡萄糖苷时，步骤(2)中，将蔗糖溶于水中配成100mmol/L溶液，蔗糖糖苷转移酶：蔗糖：抗氧剂维生素C：精制过的酶催化底物维生素C的物质的量比为1：100：1：50。