[发明专利]分室培养连续扩繁丛枝菌根真菌孢子的方法

说明书

本发明分室培养连续扩繁丛枝菌根真菌孢子的方法，是将培养室分为若干个隔离室并填充下层基质、中层基质与上层基质，进行间隔连续培植接种分离，由于丛枝菌根真菌可侵染宿主植物根系产生菌丝网，以及菌丝网的扩散与侵染性，所以只需要进行一次接种，丛枝菌根真菌孢子在相邻的隔离室中新萌发的幼苗根系就可以被其侵染，所以相对于单盆培养法具有连续性；丛枝菌根真菌的生活史为90天，每个隔离室中的宿主植物培养120天后，经遮光处理使宿主植物死亡而产生大量丛枝菌根真菌孢子，因此每间隔的天数为120与隔离室个数的比值，即可获得新鲜的丛枝菌根真菌孢子，相比于双重培养体系法，本发明培养条件要求低，操作方便，培养室可循环利用，可行性高。

技术领域

本发明涉及一种扩繁丛枝菌根真菌孢子的方法，具体是一种分室培养连续扩繁丛枝菌根真菌孢子的方法，属于微生物学领域。

背景技术

丛枝菌根真菌是专性活体营养共生的球囊菌门真菌，它不能在体外进行纯培养，只能通过丛枝菌根真菌菌丝侵染活体宿主植物根系形成共生体系，然后才能产生丛枝菌根真菌孢子，丛枝菌根真菌孢子是丛枝菌根真菌的休眠体，当其遇到宿主植物时会萌发出丛枝菌根真菌菌丝，然后侵染宿主植物根系重新形成共生体系。丛枝菌根真菌可以与超过80％的陆地维管束植物形成共生体，在干旱贫瘠的土壤中，丛枝菌根真菌菌丝可以延伸至宿主植物根系生长所达到的区域范围外，为宿主植物提供氮、磷等矿质元素和水分。此外，丛枝菌根真菌孢子产生的根外菌丝可以在宿主植物之间形成菌丝网，进行宿主植物间的物质输送和信息传递。因此，研究丛枝菌根真菌与宿主植物共生的机制以及丛枝菌根真菌对宿主植物和生态系统的功能较广泛,在生产中可以通过宿主植物根系菌根化而提高宿主植物抗逆性。然而在野外条件下有活性的野生丛枝菌根真菌孢子数目很少，无法满足生产应用的需求，而且分离鉴定较繁琐。丛枝菌根真菌与宿主植物根系形成共生体系后，如果使丛枝菌根真菌宿主死亡，丛枝菌根真菌菌丝就会产生大量丛枝菌根真菌孢子，为人工扩繁丛枝菌根真菌孢子提供了可能。

目前获得丛枝菌根真菌孢子的主要方法为单盆培养法和双重培养体系法。单盆培养法是指先种植宿主植物，然后接种丛枝菌根真菌孢子，待孢子萌发后侵染宿主植物根系，通过宿主植物生长达到孢子的扩繁。如国家知识产权局公开的《一种分层培养富集丛枝菌根真菌孢子的方法》(CN106190944B)，这种方法可以富集大量丛枝菌根真菌孢子，但是缺乏连续性，由于宿主植物生长和丛枝菌根真菌孢子的产生周期较长，所以多次扩繁就需要较长时间。双重培养法是指在无菌条件下，对培养基上的宿主植物接种萌发丛枝菌根真菌孢子，然后丛枝菌根真菌菌丝侵入根系内部形成共生体，通过根系的生长培养丛枝菌根真菌，最终获得丛枝菌根真菌孢子，这种方法培养条件要求严格且获得的孢子数量较少，无法满足生产应用中的大量需求。目前尚没有一种简单实用且可以连续获得丛枝菌根真菌孢子的方法。

发明内容

本发明的目的是为了克服目前方法获得丛枝菌根真菌孢子的缺陷，而公开一种分室培养连续扩繁丛枝菌根真菌孢子的方法。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

a.制备培养室：用隔离板将培养盆体等分为若干个隔离室，隔离板高度与培养盆体深度一致，在每个隔离板上部分别开有矩形槽，在培养盆体底端开有若干个排水孔，在隔离室底部填充具有良好吸水性、保水性及透气性的下层基质，在下层基质上填充粒径较大，吸水性及保水性差的中层基质，在中层基质上面分别铺设滤布，在滤布上面分别填充蛭石与白沙体积比为1:1的混合基质至装满培养盆体，下层基质与中层基质填充厚度分别为培养盆体深度的五分之二和十分之一，构成培养室，培养室为圆柱形或矩形或其它形状，培养室下面放置托盘；

b.首先在其中任一个隔离室中播种宿主植物种子，待其长成幼苗后在根系附近接种从野外分离且鉴定的或人工扩繁的丛枝菌根真菌孢子，通过隔离室中的宿主植物进行丛枝菌根真菌孢子的连续扩繁，每间隔的天数为120与隔离室个数的比值，依照隔离室的排列顺序在相邻隔离室中相继播种宿主植物种子，使其长成幼苗但不接种丛枝菌根真菌孢子；