[发明专利]金黄色葡萄球菌的快速恒温检测方法、引物组及应用

权利要求书

1.一种非诊断目的的针对金黄色葡萄球菌的快速恒温检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）从待测样品中提取基因组DNA；

（2）以所述基因组DNA为模板，以能扩增金黄色葡萄球菌基因组特异性碱基序列的引物组作为引物，在酶反应体系下进行恒温扩增反应；

（3）通过判断反应结果是否为阳性，确定待测样品中是否存在金黄色葡萄球菌；

其中，所述金黄色葡萄球菌基因组特异性碱基序列为GI号为148266447的金黄色葡萄球菌基因组的2645869～2646117 bp位序列；

其中，所述能扩增金黄色葡萄球菌基因组特异性碱基序列的引物组为引物组B；

引物组B：

上游外引物F3_B：5’- ATGACTAAAGCCACATCCA -3’（SEQ ID NO：5）；

下游外引物B3_B：5’- ATGCCTTACATTGATGCTG -3’（SEQ ID NO：6）；

上游内引物FIP_B：5’- TCGTTGGTGAGCAATTGAGGAGTATCGTTCCAGATTTGTG -3’（SEQ IDNO：7）；

下游内引物BIP_B：5’- GACTAGGGGTAGTAATCATTGGCCACTTTGCTATGGAACGTAA -3’（SEQID NO：8）。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）中，所述酶反应体系包括：1× BstDNA聚合酶反应缓冲液，2-9mmol/L Mg²⁺，1.0-1.6mmol/L dNTP，0.8-2.0µmol/L的FIP_B和BIP_B引物，0.15-0.3µmol/L的F3_B和B3_B引物，0.16-0.64U/μL Bst DNA聚合酶，0-1.5mol/L的甜菜碱。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述恒温扩增反应的反应程序为：① 60～65℃孵育10～90min；② 80℃终止反应2～20min。

4.针对金黄色葡萄球菌的快速恒温检测的引物，其特征在于，所述引物包括能扩增金黄色葡萄球菌基因组特异性碱基序列的引物组，所述金黄色葡萄球菌基因组特异性碱基序列为GI号为148266447的金黄色葡萄球菌基因组的2645869～2646117 bp位的核酸序列的一部分或其互补链的一部分；

其中，所述能扩增金黄色葡萄球菌基因组特异性碱基序列的引物组为引物组B；

引物组B：

上游外引物F3_B：5’- ATGACTAAAGCCACATCCA -3’（SEQ ID NO：5）；

下游外引物B3_B：5’- ATGCCTTACATTGATGCTG -3’（SEQ ID NO：6）；

上游内引物FIP_B：5’- TCGTTGGTGAGCAATTGAGGAGTATCGTTCCAGATTTGTG -3’（SEQ IDNO：7）；

下游内引物BIP_B：5’- GACTAGGGGTAGTAATCATTGGCCACTTTGCTATGGAACGTAA -3’（SEQID NO：8）。

5.一种针对金黄色葡萄球菌的快速恒温检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括能扩增金黄色葡萄球菌基因组特异性碱基序列的引物组；

其中，所述能扩增金黄色葡萄球菌基因组特异性碱基序列的引物组为引物组B；

引物组B：

上游外引物F3_B：5’- ATGACTAAAGCCACATCCA -3’（SEQ ID NO：5）；

下游外引物B3_B：5’- ATGCCTTACATTGATGCTG -3’（SEQ ID NO：6）；

上游内引物FIP_B：5’- TCGTTGGTGAGCAATTGAGGAGTATCGTTCCAGATTTGTG -3’（SEQ IDNO：7）；

下游内引物BIP_B：5’- GACTAGGGGTAGTAATCATTGGCCACTTTGCTATGGAACGTAA -3’（SEQID NO：8）。