[发明专利]一种鼻粘膜类器官培养基及培养方法有效

专利信息
申请号: 202010019555.6 申请日: 2020-01-08
公开(公告)号: CN111117946B 公开(公告)日: 2022-03-22
发明(设计)人: 李刚;汪珂;王显文 申请(专利权)人: 南方医科大学南方医院
主分类号: C12N5/071 分类号: C12N5/071
代理公司: 佛山市神机营专利代理事务所(普通合伙) 44765 代理人: 许尤庆
地址: 510000 广东*** 国省代码: 广东;44
权利要求书: 查看更多 说明书: 查看更多
摘要:
搜索关键词: 一种 粘膜 器官 培养基 培养 方法
【权利要求书】:

1.一种鼻粘膜类器官培养基,其特征在于,培养基的成分及其含量如下:不含Vit-A的B27,1X;N-acetylcysteine,1mM;EGF,50ng/ml;Noggin,100ng/ml;R-spondin 1,250ng/ml;Wnt3a,250ng/ml;A83-01,500nM;Nicotinamide,10mM;Y-27632,10μM;Glutamax,1X;Gastrin,5nM;SB202190,10μM;青霉素链霉素混合液,1X;wnt7a,10ng/ml;IL-6,50ng/ml;HEPES,1mM。

2.一种鼻粘膜类器官培养方法,其特征在于,将鼻粘膜组织预处理得到细胞沉淀,将细胞沉淀加入至含有混合胶原溶液的transwell小室内皿中,凝固成凝胶;在transwell小室外皿中加入权利要求1的培养基,恒温培养;

所述混合胶原溶液由如下组分配制而成:A.鼠尾I型胶原蛋白,B.1X浓缩无菌培养基DMEM,C.Advanced DMEM/F12,D.1mol/L无菌NaOH溶液。

3.根据权利要求2的方法,其特征在于,培养组织来源包括鼻甲、鼻中隔、鼻底、嗅区、鼻窦、鼻咽部,预处理步骤包括洗涤、切碎、消化、裂解步骤。

4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,预处理步骤具体为:鼻粘膜组织采用含2%双抗的Hanks液洗涤后,将组织切碎;加入消化酶I消化,离心弃上清,再加入消化酶II消化,离心弃上清,Hanks液吹打重悬消化的组织沉淀,过滤得到含有鼻粘膜单细胞的滤液,离心弃上清,加红细胞裂解液裂解,离心弃上清得细胞沉淀;消化酶I包括collagenasetypeIII、透明质酸酶、Insulin和EGF;消化酶II包括TrypLE Express和DNaseI酶。

5.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,混合胶原溶液的配制方法如下:先将100μlB与1mlC混合,再加入875μlA,最后加入15μlD,得到混合胶原溶液。

6.根据权利要求2-5任一项所述的方法,其特征在于,还包括更换培养基步骤:每间隔2-3天更换一次培养基,更换的培养基同权利要求1的培养基。

7.根据权利要求6所述的方法,其特征在于,更换的培养基为条件培养基。

8.根据权利要求2-5任一项所述的方法,其特征在于,还包括传代步骤:将内皿中含有细胞的混合胶原转移至15ml离心管,加入100Unit/ml胶原酶IV在37℃下解离15-20分钟,每30天对类器官进行1:2传代。

下载完整专利技术内容需要扣除积分,VIP会员可以免费下载。

该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息,商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于南方医科大学南方医院,未经南方医科大学南方医院许可,擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作,请联系【客服

本文链接:http://www.vipzhuanli.com/pat/books/202010019555.6/1.html,转载请声明来源钻瓜专利网。

×

专利文献下载

说明:

1、专利原文基于中国国家知识产权局专利说明书;

2、支持发明专利 、实用新型专利、外观设计专利(升级中);

3、专利数据每周两次同步更新,支持Adobe PDF格式;

4、内容包括专利技术的结构示意图流程工艺图技术构造图

5、已全新升级为极速版,下载速度显著提升!欢迎使用!

请您登陆后,进行下载,点击【登陆】 【注册】

关于我们 寻求报道 投稿须知 广告合作 版权声明 网站地图 友情链接 企业标识 联系我们

钻瓜专利网在线咨询

周一至周五 9:00-18:00

咨询在线客服咨询在线客服
tel code back_top