[发明专利]一种基于转录组和代谢组筛选大蒜果聚糖逆境响应关键酶基因和代谢物的方法

权利要求书

1.一种基于转录组和代谢组筛选大蒜果聚糖逆境响应关键酶基因和代谢物的方法，其特征在于，通过转录组筛选出大蒜果聚糖响应逆境后差异表达的关键基因，通过代谢组筛选大蒜果聚糖逆境响应相关代谢物，最后构建基因--代谢物相关性网络图，筛选出大蒜果聚糖逆境响应关键酶基因和代谢物。

2.根据权利要求1所述的筛选大蒜果聚糖逆境响应关键酶基因和代谢物的方法，其特征在于，步骤如下：

(1)转录组测序获得果聚糖逆境响应关键酶基因

采用TRNzol法，分别提取逆境响应前后的大蒜样品的总RNA，纯化后作为试验模板进行转录组文库的构建，将构建的文库进行Illumina HiSeq测序，转录组数据采用两倍的差异值作为表达差异显著性，即p-value(|log2Fold Change|＝1，且FDR0.05，进行筛选逆境响应前后的的差异unigene，基于KEGG数据库筛选得到大蒜逆境响应涉及的差异表达基因及通路；

(2)代谢组测序获得逆境响应的糖类差异代谢物

将逆境响应前后的大蒜样品真空冷冻干燥，研磨至粉末状，置于提取液中溶解、过滤处理后，使用超高效液相色谱和串联质谱系统进行数据采集分析；基于数据库MWDB及代谢物信息公共数据库进行代谢物定性分析；利用三重四级杆质谱的多反应监测模式完成定量分析；在对所检测到的代谢物进行定性和定量分析后，比较逆境响应前后代谢物定量信息发生的差异倍数变化，结合单变量分析的差异倍数值，差异倍数值≥2和差异倍数值≤0.5来筛选出差异代谢物；

(3)转录组和代谢组联合分析

将步骤(2)获得的差异代谢物进行KEGG通路数据库映射，选择步骤(1)获得的与果聚糖相关的差异表达基因和步骤(2)代谢组测得的与果聚糖相关的差异代谢物，选出基因和代谢物相关系数，即皮尔森系数大于0.8的进行联合分析，并用R语言构建互作网络图，即获得大蒜果聚糖逆境响应关键酶基因和代谢物。

3.根据权利要求2所述的筛选大蒜果聚糖逆境响应关键酶基因和代谢物的方法，其特征在于，所述逆境为干旱、高盐、极端温度或创伤。

4.根据权利要求2所述的筛选大蒜果聚糖逆境响应关键酶基因和代谢物的方法，其特征在于，逆境响应后的大蒜是指遭受逆境后6～10天的大蒜。

5.根据权利要求2所述的筛选大蒜果聚糖逆境响应关键酶基因和代谢物的方法，其特征在于，步骤(1)中总RNA纯化后，用Nanodrop检测RNA的纯度。

6.根据权利要求2所述的筛选大蒜果聚糖逆境响应关键酶基因和代谢物的方法，其特征在于，步骤(1)转录组文库构建后进行库检。

7.根据权利要求2所述的筛选大蒜果聚糖逆境响应关键酶基因和代谢物的方法，其特征在于，步骤(1)Illumina HiSeq测序过程中获得clean reads后，使用Trinit_y软件对过滤后的clean reads进行拼接以获取后续分析的参考序列。