[发明专利]一种分子探针及其制备方法与应用在审
| 申请号： | 202010022854.5 | 申请日： | 2020-01-09 |
| 公开（公告）号： | CN111217909A | 公开（公告）日： | 2020-06-02 |
| 发明（设计）人： | 姜慧杰;姜昊;张茗昱;张琳焓;蔺雪 | 申请（专利权）人： | 哈尔滨医科大学 |
| 主分类号： | C07K16/28 | 分类号： | C07K16/28;G01N33/574;G01N33/577;G01N21/64 |
| 代理公司： | 成都东恒知盛知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 51304 | 代理人： | 何健雄;廖祥文 |
| 地址： | 150081 黑龙*** | 国省代码： | 黑龙江;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 分子 探针 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种分子探针，其特征在于，该探针为NIR-PD-L1-mAb，所述的NIR-PD-L1-mAb化学结构式为
2.一种分子探针的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
a、纯化抗PD-L1单克隆抗体得到PD-L1 mAb；
b、将近红外光学染料加入DMSO溶液，配制成浓度为5mg/ml的溶液；
c、取1～10mg/ml的PD-L1 mAb放入离心管中，加入0.2mol/L～1.0mol/L的缓冲液混匀，PD-L1 mAb与缓冲液的体积比为1:1，混匀后加入步骤b所得溶液，立即混匀，将混合液放入20～25℃水浴避光反应2小时；
d、用PD-10柱纯化，合并蛋白峰管。
3.根据权利要求2所述的一种分子探针的制备方法，其特征在于，所述缓冲液为硼酸盐缓冲液或磷酸盐缓冲液。
4.根据权利要求2所述的一种分子探针的制备方法，其特征在于，所述缓冲液PH值为8.3～8.9。
5.根据权利要求2所述的一种分子探针的制备方法，其特征在于，所述近红外荧光染料为800CW NHS Ester。
6.根据权利要求2所述的一种分子探针的制备方法，其特征在于，所述PD-L1 mAb与800CW NHS Ester的摩尔比为1:1.1～1:3。
7.根据权利要求2所述的一种分子探针的制备方法，其特征在于，所述步骤a中纯化的具体步骤为：
1)用Na2HPO4与M NaH2PO4配制50mmol/L的磷酸盐缓冲液，Na2HPO4与NaH2PO4的摩尔比为1:1，PH为8.5；
2)用上述缓冲液将一根新的PD-10柱平衡；
3)抗体浓度的测定：取Anti-PD-1抗体用紫外分光光度计测量OD280nm和OD260nm，计算抗体浓度；
4)将步骤3的抗PD-1抗体全部上PD-1柱纯化，去除叠氮化钠，用磷酸盐缓冲液洗脱，收集蛋白峰管；
5)合并蛋白峰管后冷冻干燥。
8.基于权利要求1所述的一种分子探针的应用，其特征在于，所述应用为一种分子探针在制备一种用于检测结直肠癌细胞中PD-L1的表达水平的显影剂中的应用。
9.基于权利要求1所述的一种分子探针的应用，其特征在于，所述应用为一种分子探针在用于检测结直肠癌细胞中PD-L1的表达水平的试剂盒中的应用。
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