[发明专利]抗DNP的单克隆抗体与产生该单克隆抗体的杂交瘤细胞的制备

说明书

抗DNP的单克隆抗体与产生该单克隆抗体的杂交瘤细胞的制备。本发明涉及检测技术领域，特别涉及杂交瘤细胞株及基于杂交瘤细胞株的D型利钠肽单克隆抗体和检测试剂盒。该杂交瘤细胞株的保藏编号为CCTCC NO：C2019291。本发明具有的技术效果为：由本发明杂交瘤细胞株产生的D型利钠肽单克隆抗体效价较高，可用于酶联免疫吸附分析法(ELISA)检测D型利钠肽，具有样品操作便捷、成本低廉、反应快速、灵敏度高、特异性强等特点。

技术领域

本发明涉及小分子免疫化学分析与检测技术领域，具体涉及抗DNP单克隆抗体及其杂交瘤细胞株的制备。

背景技术

利钠肽家族作为内分泌激素，主要包括心房钠尿肽(Atrial natriureticpeptide，ANP)、脑钠肽(Brain natriuretic peptide，BNP)，C型利钠肽(C-typenatriureticpeptide)及D型利钠肽(dendroaspis natriuretic peptide，DNP)，通过利钠、利尿、舒张血管及对抗肾素-血管紧张素-醛固酮系统等途径在调节血容量、血管弹性、血压等方面发挥重要的作用。其他利钠肽还包括树眼镜蛇利钠肽、尿扩张素、肠上皮衍生肽、鸟苷素和尿鸟苷素等，它们具有相似的心血管作用，参与水平衡及血压调控。对利钠肽(尤其是脑钠肽)的研究表明，心力衰竭等心脏病患者血浆利钠肽水平升高，升高的利钠肽提示心血管事件的高危险性，监测血浆利钠肽有助于心力衰竭的诊断、治疗指导和预后评估。利钠利水效应之外，利钠肽还有许多其他重要的作用。

利钠肽家族是在心衰时释放的神经内分泌类激素,通过激活第二信使鸟苷酸环化酶(cGMP)在肾脏、血管及内分泌系统的调节中发挥作用。其血浆稳定性好、操作简单、快速、敏感度高，是目前诊断心衰、指导治疗、判断疗效的良好生化指标。

与其他利钠肽相比，DNP有较长的氨基端(C-末端)，抵抗中性内切酶(NEP利钠肽的裂解酶)的降解作用更强，血浆稳定性好。通过激活第二信使而发挥作用，在促进cGMP活性上有更大潜能，可使血浆和泌尿系中cGMP增加并抑制肾素活性，从而引起尿钠排泄和利尿，阻断心衰时过度激活内分泌系统引起的不良影响。近十年发现的利钠肽家族的新成员D型利钠肽(DNP)，出现在人类血浆和心房肌层，并在心力衰竭患者的血浆中增加，其在充血性心力衰竭(CHF)中的生物学活性尚在研究中，但目前的研究证实，DNP可能在CHF的诊断及治疗中有重要作用。

现有技术中DNP检测结果的准确性很大程度上由抗体性能所决定，一种特异性强、结合速度快的抗体将有助准确和快速检测DNP水平。

发明内容

本发明拟以先前已制备的源自非洲东部地区窄头树眼睛蛇毒液的全新的BNP天然类似物D型利钠肽(DNP)(DNP:38aa，氨基酸序列为：EVKYDPCFGHKIDRINHVSNLGCPSLRDPRPNAPSTSA)作抗原，制备DNP单克隆抗体和单克隆抗体细胞株。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：

一种D型利钠肽单克隆抗体，是由保藏号为CCTCC NO：C2019291的杂交瘤细胞分泌获得。

在本发明中，该D型利钠肽单克隆抗体的制备方法为：以D型利钠肽为免疫原多次免疫小鼠，将免疫鼠的脾细胞和骨髓瘤细胞进行融合，采用有限稀释法和间接ELISA筛选技术，获得阳性单克隆杂交瘤细胞株，诱生腹水，经纯化，得到D型利钠肽单克隆抗体。

优选地，免疫原的制备方法是将D型利钠肽偶联到血蓝蛋白载体蛋白上。

优选地，所述骨髓瘤细胞为SP2/0骨髓瘤细胞。

优选地，所述小鼠为雌性C57BL/6小鼠。

本发明还提供了该D型利钠肽单克隆抗体在制备D型利钠肽检测试剂盒中的应用。

本发明还提供了一种D型利钠肽检测试剂盒，包括括本发明提供的所述的D型利钠肽单克隆抗体。