[发明专利]结直肠癌分子标志物组合、其用途及引物组和检测试剂盒

说明书

本发明提供一种结直肠癌分子标志物组合，包括由序列表中的SEQ ID NO:1或其反向互补序列所示的AKT1基因，SEQ ID NO:2或其反向互补序列所示的AXIN2基因和SEQ ID NO:3或其反向互补序列所示的GNA12基因中的至少两种，该AKT1基因、该AXIN2基因和该GNA12基因启动子区域在结直肠癌人群中处于低甲基化状态。本发明还提供了结直肠癌分子标志物组合在制备用于检测结直肠癌的试剂中的用途，以及用于检测结直肠癌引物组和试剂盒。本发明的结直肠癌分子标志物组合对结直肠癌的检测灵敏度达到90％以上，甚至可达100％。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，涉及疾病诊断分子标志物，具体涉及一种结直肠癌分子标志物组合，该分子标志物组合在制备用于检测结直肠癌的试剂中的用途，以及相应的引物组及检测试剂盒。

背景技术

结直肠癌是世界上第三大高发癌症，2012年共确诊140万病例，造成70万人死亡。结直肠癌在我国同样为最常见的恶性肿瘤之一。早期结直肠癌患者的5年生存率超过90%，而晚期时生存率仅为10%左右。然而，由于结直肠癌早期往往无特殊症状，容易延误治疗时机，确诊时约60%的患者是中晚期。

目前，结直肠癌的早期诊断主要有两种方式，第一种是粪便潜血试验(gFOBT)或免疫法粪便潜血试验(FIT)，第二种是进行结肠镜检查。粪便潜血试验是最常用的结直肠癌诊断方法，适用于大规模人群普查的初筛手段，但其灵敏度低，只有15%-30%。结肠镜检查是结直肠癌筛查和确诊的金标准，但其检测繁琐，具有侵入性和创伤性，易被受检者排斥。

DNA甲基化是哺乳动物基因组重要的表观遗传学调控机制，可以决定一类基因的表达或者抑制，具有重要的细胞生物学意义。DNA甲基化状态的改变是多种疾病尤其是肿瘤的危险因素。肿瘤组织中存在着基因组普遍低甲基化和局部区域过甲基化的现象。抑癌基因启动子区域CpG岛过甲基化是许多肿瘤发生的早期重要事件，可致使相关基因表达下调，从而影响细胞内及细胞间正常生长凋亡。原癌基因的低甲基化，可以引起原癌基因的转录激活。近年来的研究表明，DNA甲基化状态可作为生物标记应用于癌症治疗全程，如早期诊断、病理分型、监测疾病进展，预测治疗效果和预后等，尤其在早期诊断方面具有显著的优势。组合液体活检技术，检测外周血血浆ctDNA中甲基化分子标记物具有广阔的应用前景。Septin9基因检测就是针对外周血血浆中Septin9基因甲基化的状态的检测，具有非侵入性，但其检测的敏感度较低，仅68%-79.3%。

因此，寻找新的结直肠癌标志物，尤其是早期诊断标志物对于提高早期结直肠癌诊断率，实现早期干预治疗，降低结直肠癌死亡率具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种结直肠癌分子标志物组合，该分子标志物组合对结直肠癌的检测灵敏度达到90%以上，甚至可达100%。

因此，在第一方面，本发明公开了一种结直肠癌分子标志物组合，该结直肠癌分子标志物组合包括由序列表中的SEQ ID NO: 1或其反向互补序列所示的AKT1基因，SEQ IDNO: 2或其反向互补序列所示的AXIN2基因和SEQ ID NO: 3或其反向互补序列所示的GNA12基因中的至少两种，该AKT1基因、该AXIN2基因和该GNA12基因启动子区域在结直肠癌人群中处于低甲基化状态。

进一步地，该结直肠癌分子标志物组合包括该AKT1基因中的包含至少1个甲基化CpG位点的序列片段、该AXIN2基因中的包含至少1个甲基化CpG位点的序列片段、该GNA12基因中的包含至少1个甲基化CpG位点的序列片段。

进一步地，该结直肠癌分子标志物组合包括该AKT1基因、该AXIN2基因和该GNA12基因经过亚硫酸氢盐或重亚硫酸氢盐处理后获得的，由SEQ ID NO: 4或其反向互补序列所示的经处理的AKT1基因，由SEQ ID NO: 5或其反向互补序列所示的经处理的AXIN2基因，和由SEQ ID NO: 6或其反向互补序列所示的经处理的GNA12基因。