[发明专利]一种盐酸特伦克罗、沙丁胺醇的复合免疫磁珠净化试剂盒

说明书

本发明提供一种盐酸特伦克罗、沙丁胺醇的复合免疫磁珠净化试剂盒，该试剂盒包括偶联有抗盐酸特伦克罗抗体、抗沙丁胺醇抗体的免疫磁珠固相载体和装载该免疫磁珠固相载体的配套试试剂盒，该试剂盒配合免疫磁珠纯化仪，可全自动化完成动物组织、水产品、肉制品等产品中盐酸特伦克罗、沙丁胺醇的富集与分离，分离能力强，后与高效液相色谱法、酶联免疫吸附法等联合使用，可高效、准确检测样品中盐酸特伦克罗、沙丁胺醇的含量。

技术领域

本发明属于样本前处理领域，具体涉及一种盐酸特伦克罗、沙丁胺醇的复合免疫磁珠净化试剂盒。

背景技术

沙丁胺醇、盐酸特伦克罗为一种人工合成的β肾上腺素兴奋剂，在现代畜牧养殖中被用作瘦肉精，以加速动物增长和提高脂肪型动物的瘦肉率，然而沙丁胺醇、盐酸特伦克罗摄入过量会对人体造成极其严重的危害，易出现肌肉振颤、头疼、恶心、呕吐等症状，特别是对高血压、心脏病、甲亢和前列腺肥大等疾病患者危害更大，严重的可导致死亡。2002年开始我国禁止在畜牧业中使用沙丁胺醇、盐酸特伦克罗。

目前检测盐酸特伦克罗、沙丁胺醇的方法是免疫学法和色谱分析法。这两种方法虽然灵敏度高，但由于生物组分的复杂性、待测物浓度低、前处理过程复杂等因素，现有的盐酸特伦克罗、沙丁胺醇的提取工艺并不稳定，造成提取盐酸特伦克罗、沙丁胺醇的富集效率低等，降低了检测的灵敏度和特异性，样本前处理及测定操作繁琐，费用高，不适宜于大量样本的筛查，因而急需开发可以提高盐酸特伦克罗、沙丁胺醇的富集效率的工艺方法。

发明内容

本发明的目的是在于针对现有技术存在的不足，提供一种盐酸特伦克罗、沙丁胺醇的复合免疫磁珠净化试剂盒，用于样本中盐盐酸特伦克罗、沙丁胺醇富集与净化，以解决盐酸特伦克罗、沙丁胺醇样本样品净化分离操作复杂、分离效率低的等技术问题。

为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：一种盐酸特伦克罗、沙丁胺醇的复合免疫磁珠净化试剂盒，包括偶联有盐酸特伦克罗抗体、沙丁胺醇抗体的免疫磁珠固相载体和装载该免疫磁珠固相载体的配套试试剂盒，所述的复合免疫磁珠净化试剂盒是将偶联有盐酸特伦克罗抗体、沙丁胺醇抗体的免疫磁珠固相载体放入特定的试剂盒，其以免疫磁珠为固相载体，经过化学反应活化，使得磁珠表面带有亲和配基，活化后磁珠与盐酸特伦克罗抗体、沙丁胺醇抗体偶联，制得能够对盐酸特伦克罗、沙丁胺醇实现快速富集和纯化的样本前处理试剂盒，以便后续HPLC或酶联免疫吸附法的测量。

优选地，免疫磁珠浓度为10-100mg/mL。

优选地，每个免疫磁珠净化试剂盒中所含抗盐酸特伦克罗单克隆抗体、抗沙丁胺醇单克隆抗体分别为1-5mg/mL、0.5-8mg/mL。

优选地，免疫磁珠保存液为pH7.4，0.02mo1/L的PBS缓冲液。

优选地，所述试剂盒的具体使用步骤具体为：将偶联有盐酸特伦克罗抗体、沙丁胺醇抗体的免疫磁珠从冰箱中取出恢复至室温，旋转混匀，将预先处理的样本溶液放入试管中，后将免疫磁珠转移至试管中，充分旋转重悬，室温下旋转捕获20min，以实现最大程度地捕获样本中的盐酸特伦克罗和沙丁胺醇，利用磁架进行磁分离，缓慢弃去上清液；将已捕获过样本的免疫磁珠利用清洗液清洗数次，轻摇重悬磁分离；已实现盐酸特伦克罗和沙丁胺醇的样本富集净化液；将上述得到的样本富集净化液利用有机溶剂为洗脱液进行洗脱，室温震荡几秒钟，磁分离，上清液即为待测的盐酸特伦克罗、沙丁胺醇的样本，可用于后续的HPLC或酶联免疫吸附法测定。

一种盐酸特伦克罗、沙丁胺醇的复合免疫磁珠净化试剂盒，具体制备方法为：

（1）抗体预处理：将已纯化好的抗盐酸特伦克罗单克隆抗体、抗沙丁胺醇单克隆抗体置于pH6.5 50mmol/L缓冲液透析过夜12h；

（2）活化：取一定量的磁珠于反应管中，超声分散重悬混匀，分别加入配制的EDC和NHS，在室温下放置于血液混匀仪进行活化反应2h，使溶液一直保持着悬浮混匀状态；