[发明专利]一种表达类胡萝卜素的融合基因、重组质粒及应用有效
申请号: | 202010031666.9 | 申请日: | 2020-01-13 |
公开(公告)号: | CN111334519B | 公开(公告)日: | 2021-06-08 |
发明(设计)人: | 何明霞;王洁琳;林渊源;黄俊潮 | 申请(专利权)人: | 中国科学院昆明植物研究所 |
主分类号: | C12N15/62 | 分类号: | C12N15/62;C12N15/82;C12N1/21;A01H5/10;A01H6/20;C12R1/01 |
代理公司: | 天津英扬昊睿专利代理事务所(普通合伙) 12227 | 代理人: | 徐忠丽 |
地址: | 650201 *** | 国省代码: | 云南;53 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 表达 类胡萝卜素 融合 基因 重组 质粒 应用 | ||
1.一种在亚麻荠种子中表达类胡萝卜素的方法,其特征在于,包括以下步骤:利用农杆菌花序侵染法将重组菌侵染亚麻荠的花序部分;
所述重组菌包含重组质粒;所述重组质粒以PBI121为基础载体,将表达类胡萝卜素的融合基因构建到NAPIN启动子下游;所述重组菌以农杆菌为基础菌株;
所述融合基因的结构包括:5’-八氢番茄红素合成酶基因CrtB-羟化酶基因HpBHY-β-胡萝卜素酮化酶基因CrBKT-促进类胡萝卜素合成基因Orange-3’;相邻两个基因间以2A序列连接;所述融合基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示;
在所述侵染后,还包括将所述亚麻荠的植株培育至果荚成熟,收集种子,并对种子进行转基因验证。
2.根据权利要求1所述方法,其特征在于,所述转基因验证包括观察,当所述种子呈红色时,表示转基因成功;当所述种子呈黄色时,表示转基因未成功。
3.根据权利要求1所述方法,其特征在于,所述转基因验证包括PCR验证,所述PCR验证的引物包括正向引物F和反向引物R,所述正向引物F的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示,所述反向引物R的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。
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