[发明专利]用于推算棕尾别麻蝇幼虫期发育时间的分子标记、引物组合物、试剂盒及应用

权利要求书

1.一种用于推算棕尾别麻蝇幼虫期发育时间的生物标志物，其特征在于，所述生物标志物为SpGALM37.59目的基因，所述SpGALM37.59目的基因的DNA序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一种根据权利要求1所述生物标志物设计的引物组合物，其特征在于，所述引物组合物为用于检测SpGALM37.59目的基因的引物组合物；

所述用于检测SpGALM37.59目的基因的引物组合物包括GALM-F和GALM-R，所述GALM-F的DNA序列如SEQ ID NO.3所示，所述GALM-R的DNA序列如SEQ ID NO.4所示；

还包括用于检测SpTY3H137.42内参基因的引物组合物，所述SpTY3H137.42内参基因的DNA序列如SEQ ID NO.2所示；所述用于检测SpTY3H137.42内参基因的引物组合物包括TY3H-F和和TY3H-R，所述TY3H-F的DNA序列如SEQ ID NO.5所示，所述TY3H-R的DNA序列如SEQ ID NO.6所示。

3.一种用于推算棕尾别麻蝇幼虫期发育时间的试剂盒，其特征在于，包括缓冲液和权利要求2所述的引物组合物。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述缓冲液包括T5 Fast qPCR Mix、ROXReference Dye II和ddH₂O。

5.一种权利要求3至4中任一项所述试剂盒在推算棕尾别麻蝇幼虫期发育时间中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述应用方法包括以下步骤：

S1、以不同发育时间的棕尾别麻蝇的cDNA为模板，通过权利要求3所述的引物组合物，进行差异基因的qRT-PCR扩增得到扩增产物；

S2、对所述扩增产物进行荧光定量分析获得棕尾别麻蝇的表达量；

S3、绘制表达量和发育时间的线性回归方程：

Y＝-9.891×X+19.04，所述Y为发育时间，单位为h，所述X为SpGALM37.59基因的CT值减去SpTY3H137.42内参基因的CT值；

S4、通过检测待测棕尾别麻蝇的cDNA的SpGALM37.59基因的CT值计算棕尾别麻蝇的发育时间。