[发明专利]一种抗肿瘤微颗粒的制备方法、药剂及应用在审
申请号: | 202010032335.7 | 申请日: | 2020-01-13 |
公开(公告)号: | CN111084787A | 公开(公告)日: | 2020-05-01 |
发明(设计)人: | 杨坤禹;金红林;孙亚洁;万超;田宇 | 申请(专利权)人: | 华中科技大学同济医学院附属协和医院 |
主分类号: | A61K35/13 | 分类号: | A61K35/13;A61K9/127;A61K45/06;A61P35/00;A61P35/04;A61K41/00 |
代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
地址: | 430022 湖北*** | 国省代码: | 湖北;42 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 肿瘤 颗粒 制备 方法 药剂 应用 | ||
本发明提供一种抗肿瘤微颗粒的制备方法,包括以下步骤:1)获得离体肿瘤细胞进行原代肿瘤细胞培养,并获得原代肿瘤细胞;2)将所述步骤1)得到的原代肿瘤细胞及培养液进行X线照射,收集放疗后的上清液,获得所需微颗粒和凋亡的肿瘤细胞碎片混合物;3)将所述步骤2)得到的混合物进行梯度离心,即得到所述抗肿瘤微颗粒。本发明还提供一种抗肿瘤微颗粒药剂,由抗肿瘤微颗粒通过纯化和浓缩而获得。本发明提供的抗肿瘤微颗粒的制备方法制得的抗肿瘤微颗粒可用于制备抗肿瘤药物。本发明可解决常规放疗不能适用的技术问题。
技术领域
本发明涉及抗肿瘤领域,更特别地,涉及一种抗肿瘤微颗粒的制备方法、药剂及应用。
背景技术
放射治疗是临床常规治疗肿瘤的有效治疗手段,肿瘤放射治疗是利用放射线产生的电离辐射来治疗肿瘤的一种局部治疗方法。大约70%以上的肿瘤患者在治疗的过程中需要用放射治疗,约有40%的癌症可以用放疗根治。放疗导致的旁观者效应(radiation-induced bystander effect,RIBE)是指射线辐射细胞后,不仅会导致被照射细胞死亡,还会导致未受到辐射的周围细胞死亡。研究发现,放疗诱导细胞释放的微颗粒是导致旁观者效应的主要效应产物。但是这种微颗粒目前尚没有完备的制取方法,无法扩展因放疗技术原因造成的放疗局限性问题。
发明内容
本发明提供了一种抗肿瘤微颗粒的制备方法、药剂及应用,该抗肿瘤微颗通过间接放疗实现抗肿瘤,解决常规放疗不能适用的技术问题。
本发明是由以下技术手段实现的:
一种抗肿瘤微颗粒的制备方法,包括以下步骤:
1)获得离体肿瘤细胞进行原代肿瘤细胞培养,并获得原代肿瘤细胞;
2)将所述步骤1)得到的原代肿瘤细胞及培养液进行X线照射,收集放疗后的上清液,获得所需微颗粒和凋亡的肿瘤细胞碎片混合物;
3)将所述步骤2)得到的混合物进行离心,即得到所述抗肿瘤微颗粒,该微颗粒为磷脂双分子层组成的囊泡样结构,直径为100-1000nm之间(见图1和图2)。
步骤3)中所述离心包括依次进行第一离心、第二离心、第三次离心所述第一离心的转速为1000g,时间为10分钟,得上清;第二离心的转速为14000g,时间为2分钟,得上清;第三次离心的转速为14000g,时间为60分钟,得沉淀即为微颗粒。
所述步骤2)的X线放射剂量为2-30Gy,X线能量为6MV,所述上清液收集时间为放疗后的第2-7天。
所述肿瘤细胞系包括人源性和鼠源性的多种细胞系:人乳腺癌细胞系MCF-1、HBL-100,人肺癌细胞系A549、H292、H1299、Calu-1、H460、H522,人鼻咽癌细胞系HONE1、小鼠黑色素瘤细胞系B16、小鼠肺癌细胞系Lewis细胞等;所述离体肿瘤细胞来自于恶性胸腔或腹腔积液或实体瘤。
一种抗肿瘤微颗粒的制备方法制得的抗肿瘤微颗粒,所述抗肿瘤微颗粒为携载活性氧ROS的微囊泡结构,所述微囊泡结构的粒径为100-1000nm;所述抗肿瘤微颗粒的携氧量不低于细胞内活性氧量。
一种抗肿瘤微颗粒药剂,由所述的抗肿瘤微颗粒通过纯化和浓缩而获得。
一种抗肿瘤微颗粒的制备方法制得的抗肿瘤微颗粒在制备抗肿瘤药物中的应用。
本发明具有以下优点:
①对不能进行放射治疗的肿瘤,可以采用本技术制得药剂实现间接放疗;
②相较于放疗,本技术可通过静脉注射药剂,反复多次给药,可实现对转移瘤起到抑制作用;
③自体来源的微颗粒制得的药剂具有较好的生物安全性和生物相容性;
④制备工艺简单,便于规模化生产;
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