[发明专利]HQ06表位突变的猪瘟候选标记疫苗株及其应用

说明书

本发明公开了HQ06表位突变的猪瘟候选标记疫苗株及其应用。本发明以C株为骨架，单个点突变E2蛋白HQ06抗原表位的3个关键氨基酸¹¹⁷F、¹¹⁹G和¹²²P，构建了3株突变体病毒。本发明所构建的3株突变体病毒均失去了与单克隆抗体(mAb)HQ06的反应性，保留了与CSFV E2蛋白其他抗原位点的反应性，生物学特性与C株保持一致；其中，rHCLV‑E2P122A在体外可达到亲本病毒的生长滴度，在家兔和家猪体内均能够诱导机体产生针对CSFV E2的抗体和针对CSFV的中和抗体，但失去了诱导机体产生针对HQ06抗原表位的特异性抗体，本发明的rHCLV‑E2P122A毒株能够开发成猪瘟标记疫苗。

技术领域

本发明涉及猪瘟标记疫苗株，尤其涉及HQ06表位突变的猪瘟候选标记疫苗株及其应用，属于猪瘟标记疫苗株领域。

背景技术

猪瘟(Classical swine fever,CSF)是猪的一种以高热稽留和广泛性出血为主要特征的高度传染性疾病，给世界上许多国家的养猪业造成了巨大的经济损失。世界动物卫生组织(OIE)将其列入须申报(Notifiable)的OIE动物疫病名录。中国《国家中长期动物疫病防治规划(2012-2020年)》将猪瘟列为五种优先防治的“一类动物疫病”之一。

猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)是CSF的病原，它是黄病毒科(Flaviviridae)瘟病毒属(Pestivirus)的成员。CSFV为单股正链RNA病毒，其基因组全长约12.3kb，包含5′非编码区(untranslated region,UTR)、一个长的开放阅读框和3′UTR。该阅读框编码由3898个氨基酸组成的多聚蛋白，这一多聚蛋白在细胞和病毒蛋白酶的作用下裂解为12个成熟的病毒蛋白，包括4种结构蛋白(C、E^rns、E1和E2)和8种非结构蛋白(N^pro、p7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B)，其中E^rns、E1和E2为病毒的囊膜蛋白(Heimann M,Roman-Sosa G,Martoglio B,et al.Core protein of pestiviruses is processed at the Cterminus by signal peptide peptidase[J].J Virol,2006,80(4):1915-1921.Gottipati K,Ruggli N,Gerber M,et al.The structure of classical swinefever virus N(pro):a novel cysteine autoprotease and zinc-binding proteininvolved in subversion of type I interferon induction[J].PLoS Pathog,2013,9(10):e1003704.)。

目前，中国主要采取免疫接种的措施来预防猪瘟，常用的疫苗为猪瘟兔化弱毒疫苗株(C株或HCLV株)。该疫苗是中国学者在20世纪50年代通过将CSFV强毒株在兔体内连续传480余代后培育而成的，该疫苗株集高度安全性和良好免疫原性于一身，可同时诱导体液免疫和细胞免疫，对各种年龄的家猪和野猪均安全，并且能够保护不同年龄的猪抵抗猪瘟强毒的攻击(仇华吉,童光志,沈荣显.猪瘟兔化弱毒疫苗——半个世纪的回顾[J].中国农业科学,2005,38(8):1675-1685.)。由于C株性能稳定、安全和免疫效果良好，在国际上被公认为安全有效的弱毒疫苗。早在在20世纪60年代，C株从中国引入东欧和亚洲友邦，被称为“K株”或“LC株”，随后又传到西欧和拉美各国，其为世界猪瘟的防控做出了重大贡献。时至今日，C株仍被世界上许多国家使用，其地位和价值至今无可动摇。