[发明专利]热稳定性提高的胺脱氢酶突变体及其基因工程菌的构建和应用

权利要求书

1.一种热稳定性提高的胺脱氢酶突变体，其特征在于，

所述胺脱氢酶突变体是在SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列上进行突变，所述突变位点选自A35D、L53R、S210A、T321P中一种或一种以上组合。

2.根据权利要求1所述的热稳定性提高的胺脱氢酶突变体，其特征在于，所述突变位点为A35D、L53R、S210A、T321P、A35D/L53R、A35D/S210A、A35D/T321P、L53R/S210A、L53R/T321P、S210A/T321P、A35D/L53R/S210A、A35D/L53R/T321P、A35D/S210A/T321P、L53R/S210A/T321P或A35D/L53R/S210A/T321P。

3.一种编码如权利要求1或2所述的热稳定性提高的胺脱氢酶突变体的基因。

4.一种包含如权利要求3所述的基因的重组质粒。

5.一种包含如权利要求1或2所述的热稳定性提高的胺脱氢酶突变体的可溶性蛋白、固定化酶或工程菌。

6.一种如权利要求1或2所述的热稳定性提高的胺脱氢酶突变体的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

通过在Pfam数据库及NCBI数据库中搜索SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列，找出所有与SEQ ID NO.2一致性大于30%的蛋白质序列，删除其中的重复出现的相同序列，将剩余氨基酸序列整理成fasta.格式，输入Clustalx1.83软件进行多序列比对，得到fasta.文件，上传到Consensus Maker v2.0.0服务器，根据需要修改设置参数后，该在线软件ConsensusMaker v2.0.0服务器将生成可以后期编辑的consensus sequence；

通过swissmodel在线工具对获得的SEQ ID NO.2所示的蛋白质三维结构预测，采用PyMOL观测SEQ ID NO.2所示的蛋白质晶体结构，筛选出热稳定性相关的突变位点为：A35D、L53R、S210A、T321P。

7.根据权利要求6所述的热稳定性提高的胺脱氢酶突变体的构建方法，其特征在于，

突变位点A35D的扩增引物序列为SEQ ID NO.20、SEQ ID NO.21；

突变位点L53R的扩增引物序列为SEQ ID NO.22、SEQ ID NO.23；

突变位点S210A的扩增引物序列为SEQ ID NO.24、SEQ ID NO.25；

突变位点T321P的扩增引物序列为SEQ ID NO.26、SEQ ID NO.27。