[发明专利]一种青蒿TCP类转录因子AaTCP15在调控青蒿素表达量中的应用

权利要求书

1.一种青蒿TCP类转录因子AaTCP15在调控青蒿素表达量中的应用，其特征在于，具体包括以下步骤：

步骤一、将所述转录因子AaTCP15的编码基因的核苷酸序列连接于植物表达调控序列上，构建含有所述转录因子AaTCP15的编码基因的植物过量表达载体；所述转录因子AaTCP15的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；

步骤二、将青蒿素生物合成关键酶基因DBR2和ALDH1的启动子ProDBR2和ProALDH1分别连入载体pGreenII0800-LUC，构建植物双荧光素检测报告载体pGreenII0800-ProDBR2和pGreenII0800-ProALDH1；

步骤三、将所述植物过量表达载体和所述植物双荧光素检测报告载体分别转入宿主菌株农杆菌GV3101中，获得含有表达载体的工程菌株；

步骤四、将含有所述植物过量表达载体的所述工程菌株分别与含有所述植物双荧光素检测报告载体pGreenII0800-ProDBR2和pGreenII0800-ProALDH1的所述工程菌株混合后，注射到植株中，并检测荧光强度，确定所述转录因子AaTCP15对所述青蒿素生物合成关键酶基因DBR2和ALDH1的启动子的激活作用；

步骤五、将所述转录因子AaTCP15的编码基因的核苷酸序列连接于植物表达调控序列上，构建含有所述转录因子AaTCP15的编码基因的反向互补序列的反义干扰载体；

步骤六、将所述步骤一的所述植物过量表达载体与所述步骤五 的所述反义干扰载体转入宿主菌株农杆菌EHA105中，分别获得含有所述植物过量表达载体和所述反义干扰载体的工程菌株，并转入青蒿植株中；

步骤七，筛选获得含有转录因子AaTCP15的转化细胞，并再生转基因植株，得到青蒿素含量显著提高的过量表达转基因植株和青蒿素含量显著降低的反义干扰表达转基因植株。

2.如权利要求1所述的青蒿TCP类转录因子AaTCP15在调控青蒿素表达量中的应用，其特征在于，所述步骤三和所述步骤六中的所述转入所述宿主菌株的方法采用冻融法。

3.如权利要求1所述的青蒿TCP类转录因子AaTCP15在调控青蒿素表达量中的应用，其特征在于，所述植物双荧光素检测报告载体pGreenII0800-ProDBR2和pGreenII0800-ProALDH1转入的所述宿主菌株为带有pSoup19辅助质粒的农杆菌GV3101菌株。

4.如权利要求1所述的青蒿TCP类转录因子AaTCP15在调控青蒿素表达量中的应用，其特征在于，所述步骤四中的含有所述植物过量表达载体的所述工程菌株与含有所述植物双荧光素检测报告载体pGreenII0800-ProDBR2和pGreenII0800-ProALDH1的所述工程菌株按1：1混合。

5.如权利要求1所述的青蒿TCP类转录因子AaTCP15在调控青蒿素表达量中的应用，其特征在于，所述步骤七中采用抗生素筛选所述转化细胞。

6.如权利要求5所述的青蒿TCP类转录因子AaTCP15在调控青蒿素表达量中的应用，其特征在于，所述抗生素选用卡那霉素。