[发明专利]一种藏药十八味诃子利尿丸的应用及其对2型糖尿病脑病大鼠的脑保护作用的试验方法

权利要求书

1.一种筛选藏药十八味诃子利尿丸对2型糖尿病脑病大鼠的脑保护作用方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤1，选取SPF级SD雄性大鼠，4周龄，体重为80-100g,使用普通饲料适应性喂养1周后，采用高脂饲料联合链脲佐菌素造模，模拟2型糖尿病脑病并发症动物模型；将大鼠随机分为正常对照组、糖尿病组；其中正常对照组给予普通饲料喂养，糖尿病脑病组给予高脂饲料喂养，喂养持续14周；

步骤2，将糖尿病脑病组大鼠禁食10-12h,按照STZ总剂量为20mg/kg进行尾静脉注射，正常对照组给予相同剂量的柠檬酸钠缓冲液，STZ注射1周后，尾静脉检测大鼠随机血糖，血糖≥16.7mmol/L判断糖尿病造模成功；

步骤3，继续饲养6周后通过Mirros水迷宫实验筛选2型糖尿病脑病大鼠：前4d为训练，每天下午训练4次，每只大鼠每次训练2min，将大鼠面向池壁随机从4个入水点放入水中，记录从入水到找到站台所用的时间作为测试成绩；如果大鼠在2min内未找到平台，逃避潜伏期计为2min，并由实验者将其牵引至平台上，停留30s后，放回笼中休息30min之后，开始下一次测试；第5天为测试期，记录逃避潜伏期；

步骤4，同正常对照组比较，逃避潜伏期明显延长，且出现认知功能减退的视为2型糖尿病脑病大鼠；将筛选出的2型糖尿病脑病大鼠随机分为糖尿病脑病组及藏药组；

步骤5，开始灌胃：灌胃周期为4周，灌胃方法为隔天灌胃，灌胃前禁食不禁水4-6h；藏药十八味诃子利尿丸灌胃剂量为350mg/kg,溶于3ml生理盐水；灌胃4周后，再次行Mirros水迷宫实验，实验步骤同步骤3，记录逃避潜伏期；

步骤6，处死取大鼠脑部海马组织；

步骤7，Fluo-jade-c染色分析海马神经元退行性变化；Western blots检测海马NF-κB水平；

步骤8，统计分析。

2.根据权利要求1所述的一种筛选藏药十八味诃子利尿丸对2型糖尿病脑病大鼠的脑保护作用方法，其特征在于：步骤1中的普通饲料组分为：小麦10份，麸子30份，玉米面30份，豆饼20份，鱼粉5份，骨粉2份，酵母2份和食盐1份。

3.根据权利要求1或2所述的一种筛选藏药十八味诃子利尿丸对2型糖尿病脑病大鼠的脑保护作用方法，其特征在于：步骤2中的高脂饲料组分为：小麦10份，麸子30份，玉米面30份，豆饼20份，鱼粉5份，骨粉2份，酵母2份，食盐1份，猪油5份、酥油5份、蔗糖10份、胆固醇2.5份、胆酸钠1份。

4.根据权利要求3所述的一种筛选藏药十八味诃子利尿丸对2型糖尿病脑病大鼠的脑保护作用方法，其特征在于：高脂喂养14周，行糖耐量、胰岛素耐量试验，建立胰岛素抵抗模型后给予小剂量STZ尾静脉注射。

5.根据权利要求1、2或4任一项所述的一种筛选藏药十八味诃子利尿丸对2型糖尿病脑病大鼠的脑保护作用方法，其特征在于：糖尿病模型成模标准：(1)STZ注射前存在胰岛素抵抗；(2)STZ注射1周后，随机血糖≥16.7mmol/L。