[发明专利]提高西番莲初代培养成活率的方法

说明书

本发明公开了一种提高西番莲初代培养成活率的方法，包括以下步骤：(1)初代培养基制备；(2)外植体培育：选择西番莲枝条，将枝条剪成含有1‑2个芽的茎段，剪去部分叶片，扦插于育苗盆内，置于大棚，扦插时喷一次杀菌、杀虫及防控病毒的药剂，每隔5‑10天喷一次杀菌、杀虫及防控病毒的药剂，栽培一段时间后取枝条作为外植体进行组培；(3)外植体消毒：剪去枝条的叶片，将枝条剪成多段，腋芽位于茎段中部，用含有HgCl₂和抗坏血酸的消毒液消毒；(4)外植体接种及培养。本发明的方法，培养外植体材料，将材料置于棚内培养，进行前期杀菌等处理，提高外植体的清洁度，缩短HgCl₂消毒时间，使初代培养污染率降低至15％以下。降低外植体褐化率，提高成活率。

技术领域

本发明涉及农作物组培的技术领域，特别涉及一种提高西番莲初代培养成活率的方法。

背景技术

西番莲是西番莲科西番莲属的多年生常绿木质藤本植物，原产南美洲的巴西至阿根廷一带，在我国主要分布在台湾、广东、福建、广西、云南等省，它集食用、药用、油用和绿化观赏为一体，经济价值高。西番莲果实中果汁含量占果重30％-40％，富含人体必需的17种氨基酸、有机酸及VC、SOD、磷、钙、铁、钾、蛋白质等多种营养成分，具有很高的营养价值。目前我国西番莲扩繁主要采用实生苗与蔓条扦插繁殖，生产中存在较多问题，如实生苗的培育种子萌发率与成活率低，缓苗期长、抗病性低、后代性状差异大等问题；蔓条扦插繁殖若操作不当会加快品种退化、病害增加致使产量降低，这些问题影响和制约了西番莲的生产与加工。利用组织培养方法对西番莲进行快繁研究，可以对西番莲植株进行脱毒，克服无性繁殖率低、繁殖速度慢的缺点，加上组织培养不受季节和气候等因素的制约，具有节约土地资源，速度快，质量高，技术密集，便于集约化管理和工厂化生产的优点。目前西番莲组培快繁存在很多问题，其中外植体消毒过程中污染率高，褐化死亡率高，初代培养成活率低的问题，严重影响组培效率。

公开于该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

发明内容

本发明的目的在于提供一种提高西番莲初代培养成活率的方法，从而克服西番莲组培过程中污染率、褐化死亡率高，初代培养成活率低的缺点。

为实现上述目的，本发明提供了一种提高西番莲初代培养成活率的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)初代培养基制备；

(2)外植体培育：选择西番莲枝条，将枝条剪成含有1-2个芽的茎段，剪去部分叶片，扦插于育苗盆内，置于大棚，扦插时喷一次杀菌、杀虫及防控病毒的药剂，之后每隔5-10天喷一次杀菌、杀虫及防控病毒的药剂，栽培一段时间后取枝条作为外植体进行组培；

(3)外植体消毒：剪去枝条的叶片，将枝条剪成多段，腋芽位于茎段中部，然后用含有HgCl₂和抗坏血酸的消毒液消毒；

(4)外植体接种及培养。

优选地，上述技术方案中，初代培养基的制备方法包括以下步骤：

(1)初代培养基配方：MS基本培养基、6-BA 0.5-1.5mg/L、IBA 0.05-0.15mg/L、抗坏血酸0.001-0.02g/L、水解酪蛋白0.2-0.3g/L、蔗糖20-40g/L、琼脂4-7g/L；

(2)调节培养基PH至5.8-6.0，分装在容器中，在容器口塞上棉塞，包覆牛皮纸并扎牢，然后在110-120℃条件下高压灭菌15-20min。

优选地，上述技术方案中，步骤(2)中剪去部分叶片为剪去叶片的2/3-3/4。