[发明专利]一种耐受辣椒耐高温的乙醇高产酵母菌及其验证方法

权利要求书

1.一种耐受辣椒耐高温的乙醇高产酵母菌的验证方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、筛选出甘蔗糖蜜中的乙醇高产酵母菌株，记为LSK2；

S2、使LSK2菌株进行辣椒耐受的适应性进化，获得适应后菌株，记为LSK2pe；

S3、构建辣椒素存在的环境，通过比较辣椒环境下LSK2与LSK2pe的生长状况、利用葡萄糖发酵的能力、利用淀粉发酵的能力以及检测高温环境下LSK2pe发酵能力进行验证。

2.根据权利要求1所述的一种耐受辣椒耐高温的乙醇高产酵母菌的验证方法，其特征在于，步骤S2具体包括：

S21、将步骤S1中获取到的LSK2菌株按一定百分比浓度接种量接种至含葡萄糖的培养基中，并加入初始百分比浓度辣椒粉至培养基中，培养直至获得当前百分比浓度辣椒粉条件下的稳定菌株；

S22、将上一步骤获得的稳定菌株按与上一步骤同样百分比浓度接种量转移至另一含同样浓度葡萄糖的培养基中，并加入较上一步骤更高百分比浓度的辣椒粉，在与上一步骤同样的条件下培养，直至获得当前百分比浓度辣椒粉条件下的稳定菌株；

S23、在预设辣椒粉浓度梯度范围内重复步骤S22直至获得适应高辣椒浓度的菌株，记为LSK2pe。

3.根据权利要求2所述的一种耐受辣椒耐高温的乙醇高产酵母菌的验证方法，其特征在于，步骤S21和S22中培养直至获得当前百分比浓度辣椒粉条件下的稳定菌株具体步骤包括：

(1)将菌株按一定百分比浓度接种量接种至含葡萄糖的培养基中，并加入当前百分比浓度辣椒粉至培养基后，进行一个适应性进化周期的培养；

(2)将上一步骤中经过一个适应性进化周期培养后的菌株按与上一步骤相同百分比浓度接种量转移至另一含同样浓度葡萄糖的培养基中，并加入与上一步骤相同百分比浓度辣椒粉至培养基中，再进行一个适应性进化周期的培养；

(3)重复步骤(2)多次直至获得当前百分比浓度辣椒粉条件下的稳定菌株。

4.根据权利要求3所述的一种耐受辣椒耐高温的乙醇高产酵母菌的验证方法，其特征在于，步骤S2中预设辣椒粉浓度梯度范围为1％～25％，初始百分比浓度为1％，重复步骤(2)至少2次，适应性进化周期至少为48h。

5.根据权利要求1所述的一种耐受辣椒耐高温的乙醇高产酵母菌的验证方法，其特征在于，步骤S3中将获取的LSK2和LSK2pe菌株在同样的条件下进行培养，并取样分别稀释获得多组不同稀释倍数下的菌液，同时制备含有不同百分比浓度辣椒粉培养基，从各组稀释倍数菌液取样加入至各个不同百分比浓度辣椒粉培养基中，经一定时间培养后获取各个培养基中的LSK2、LSK2pe菌株生长状况，验证辣椒环境下LSK2pe相对于LSK2菌株生长能力是否提高。

6.根据权利要求1所述的一种耐受辣椒耐高温的乙醇高产酵母菌的验证方法，其特征在于，步骤S3中通过分别将LSK2、LSK2pe菌株加入至含一定百分比浓度辣椒粉以及葡萄糖的培养基中测定其在辣椒环境下的利用葡萄糖发酵能力，验证辣椒环境下LSK2pe相对于LSK2菌株葡萄糖发酵能力是否提高。

7.根据权利要求1所述的一种耐受辣椒耐高温的乙醇高产酵母菌的验证方法，其特征在于，步骤S3中通过分别将LSK2、LSK2pe加入至含糖苷酶、一定百分比浓度辣椒粉以及淀粉的培养基中测定其在辣椒环境下的利用淀粉发酵能力，验证辣椒环境下LSK2pe相对于LSK2菌株利用淀粉发酵的能力是否提高。

8.根据权利要求6所述的一种耐受辣椒耐高温的乙醇高产酵母菌的验证方法，其特征在于，步骤S3中将LSK2pe加入至多个含一定百分比浓度辣椒粉以及葡萄糖的培养基中，并为多个培养基提供不同的发酵温度，通过检测不同温度下发酵结果验证LSK2pe能否同时耐辣椒且在高温环境下发酵。

9.根据权利要求8所述的一种耐受辣椒耐高温的乙醇高产酵母菌的验证方法，其特征在于，多个培养基的发酵温度设置范围为30℃～45℃。

10.根据权利要求1至9任一项方法获得的耐受辣椒耐高温的乙醇高产酵母菌，其特征在于，为基于甘蔗糖蜜中筛选出的并经辣椒耐受适应性进化获得的乙醇高产菌株，并经过高温环境下发酵验证，用于含辣椒素的餐厨垃圾的高温环境下微生物发酵。