[发明专利]检测平菇中吲哚乙酸含量的方法

说明书

本发明公开了一种检测平菇中吲哚乙酸含量的方法，利用预冻的80%冰甲醇提取平菇样品中的吲哚乙酸，利用三氯化铁的无机酸溶液作为显色液，采用分光光度计测定样品中吲哚乙酸的吸光值，通过该吸光值计算得到平菇样品中吲哚乙酸的含量。本发明利用在‑20℃预冻12h以上的80%冰甲醇（甲醇:水=4:1）作为提取溶剂，能够有效提取平菇中的吲哚乙酸。本发明利用吲哚乙酸在高氯酸环境中与三价铁离子生成红色络合物的原理，采用分光光度计法测定平菇中吲哚乙酸在530nm处的吸光值，该方法不仅操作简单、成本低，还具有较高的灵敏度和检测精度，还能够同批次检测多个平菇样品中的吲哚乙酸含量，分析速度快，为研究吲哚乙酸对平菇生长发育机制的影响提供技术基础。

技术领域

本发明涉及平菇中吲哚乙酸的检测，尤其是涉及一种检测平菇中吲哚乙酸含量的方法。

背景技术

生长素（化学本质为吲哚乙酸，即IAA）作为一种重要的植物激素，其影响细胞分裂、伸长和分化，也影响营养器官和生殖器官的生长、成熟和衰老。研究发现，植物体内快速分裂和生长的部位，如茎叶分生组织、幼嫩的叶片等组织、幼嫩的果实和种子等部位中生长素含量都比较高，促进植物及果实的生长发育。

平菇（Pleurotus ostreatus）学名侧耳，又名北风菌、冻菌、蚝菌、鲍鱼菇等，其味道鲜美、营养丰富、具有很高的食用价值，目前已经在我国很多地区得到了大面积栽培。平菇的生长发育周期包括菌丝生长阶段和子实体生长阶段，平菇发育周期的长短是影响平菇栽培成本高低的重要因素。目前，平菇生长发育相关的研究主要集中在外界环境因子（如光照、温度和氧气等），尚未出现平菇中吲哚乙酸含量的检测方法的报道，使得有关生产素对平菇生长发育影响的报道很少。

发明内容

本发明目的在于提供一种检测平菇中吲哚乙酸含量的方法，该检测方法简单、灵敏度高、分析速度快且成本低，为吲哚乙酸对平菇生长发育机制的相关研究提供技术参考。

为实现上述目的，本发明采取下述技术方案：

本发明所述的检测平菇中吲哚乙酸含量的方法，采用分光光度计测定平菇样品中吲哚乙酸的吸光值，通过该吸光值计算得到平菇样品中吲哚乙酸的含量，具体包括以下步骤：

第一步，称取平菇样品于无菌研钵中，向无菌研钵中快速加入3～10mL预冻的80%冰甲醇，研磨，将研磨后的平菇浆液移取至离心管内，用80%冰甲醇将平菇浆液定容，离心分离，弃沉淀，得到含有吲哚乙酸的样品提取液，备用；

第二步，称取吲哚乙酸于烧杯中，用无水乙醇溶解后转移至容量瓶中，然后用蒸馏水定容，混匀，得到吲哚乙酸贮备液；将吲哚乙酸贮备液稀释得到不同浓度的吲哚乙酸标准溶液；

第三步，移取第二步稀释得到的各吲哚乙酸标准溶液于不同的反应管内，以等体积的蒸馏水作为空白，然后向吲哚乙酸标准液和空白中分别加入显色液，混匀，恒温显色反应20～40min后，用分光光度计测定吲哚乙酸标准液的吸光值，以吲哚乙酸的浓度为横坐标，以吸光值为纵坐标，绘制吲哚乙酸标准曲线；

第四步，移取第一步中的样品提取液于反应管内，以与样品提取液等体积的蒸馏水为空白，向样品提取液和空白中分别加入显色液，遮光恒温显色反应20～40min后，用分光光度计测定平菇样品的吸光值，根据第三步中绘制的吲哚乙酸标准曲线计算得到样品提取液中吲哚乙酸的浓度，再利用下述公式计算平菇样品中吲哚乙酸的含量，

平菇样品中吲哚乙酸的含量（μg/g）=（A×V₁）÷（W×V₂）；

其中，A为第四步中参加显色反应的菌丝提取液中吲哚乙酸的浓度，μg/mL；V₁为平菇样品提取液的总体积，mL；W为平菇样品的重量，g；V₂为第四步中参加显色反应的样品提取液体积，mL。