[发明专利]阿尔兹海默症的TOMM40基因及APOE基因的易感位点的检测方法及试剂盒

说明书

阿尔兹海默症的TOMM40基因及APOE基因的易感位点的检测方法，所述方法包括步骤：（1）提取样本的基因组DNA，扩增样品的TOMM40基因3' UTR中包含rs10119位点的区域及5' nearGene中包含rs71352238位点的区域，及APOE基因包含rs429358位点的区域和rs7412位点的区域，得到扩增产物；（2）使用HRM分析技术和Tagman分析技术检测扩增产物中rs10119位点、rs71352238位点、rs429358位点及rs7412位点的基因型。

技术领域

本发明涉及一种检测阿尔兹海默症易感位点的方法及试剂盒。

背景技术

阿尔兹海默症又称老年痴呆，是一种不可逆的神经退行性脑部疾病，是影响老年人的痴呆症的最常见原因。阿尔兹海默症的遗传学可分为早老性痴呆和老年性痴呆。早老性痴呆通常在65岁之前发作。老年性痴呆发病于65岁以后，是阿尔兹海默症的更普遍形式。老年性痴呆的遗传学较为复杂，涉及多个基因，只有中等程度的家族聚集。载脂蛋白E（APOE）是与老年性痴呆相关的最完善的基因，其中带有ε4等位基因（APOE e4）的人罹患阿尔兹海默症的风险大大增加。但是包括APOE在内大多数阿尔兹海默症遗传数据，，都是基于对白种人的研究。先前的研究已经确定，并非白种人中发现的所有阿尔兹海默症易感基因位点在汉族人群中都具有相同的相关性，这表明汉族人群中的阿尔兹海默症的机制可能存在与高加索人中遗传风险因素不同的遗传风险因素。其中APOE的基因型与SNP位点基因型的关系见下表

近年来，越来越多的研究发现线粒体功能障碍在神经系统疾病中起重要作用。据报道，保持线粒体正常功能所需的蛋白质转移的TOMM40（线粒体外膜转移酶40）在相关疾病的发病机理中起着重要作用。TOMM40是由外膜转移酶（TOM）形成的化合物，是在蛋白质输入到线粒体重要入口通道的过程中形成的亚基，这对蛋白质转运到线粒体至关重要。随着阿尔兹海默症发病机制中线粒体功能障碍学说的相关研究增多，一些研究者对定位于19q13的TOMM40基因的多态性与阿尔兹海默症的相关性进行了研究，有研究报道TOMM40基因可能影响脑白质的完整性，并与阿尔兹海默症发病年龄有关，确定TOMM40多态性在汉族人群AD的发病机理中起着重要作用。一些研究认为TOMM40与阿尔兹海默症的发病有关，因为TOMM40中的SNP直接导致线粒体功能障碍，例如能量代谢功能障碍，氧化应激损伤等。但具体的SNP与阿尔海默茨症发病的关系目前尚无深入的研究，因此找到TOMM40基因中与阿尔兹海默症高度相关的易感位点，并与APOE联合应用为现有技术中亟待解决的问题。

发明内容

在先期研究中，我们对830多例阿尔兹海默症患者和630多例无阿尔兹海默症病症的健康老人进行分析，发现TOMM40基因中rs10119号SNP位点（以下均简称rs10119位点）及rs71352238号SNP位点（以下均简称rs71352238位点）与阿尔兹海默症具有强相关性，其不仅独立于APOE基因作用于阿尔兹海默症，而且与APOE协同对阿尔兹海默症发病起促进作用，此分析比较采用R×C×2检验，用SPSS软件进行统计分析，经过性别、年龄校正后的分析结果如下表所示：

同时在研究中还确定了APOE基因中的rs429358号SNP位点和rs7412号SNP位点与阿尔兹海默症的相关性。基于此发现为解决现有技术中的问题，本发明采用的技术方案为：

为了解决上述问题，本发明提供的技术方案是：阿尔兹海默症的TOMM40基因及APOE基因的易感位点的检测方法，所述方法包括步骤：（1）提取样本的基因组DNA，扩增样品的TOMM40基因3' UTR中包含rs10119位点的区域及5' nearGene中包含rs71352238位点的区域，及APOE基因包含rs429358位点的区域和rs7412位点的区域，得到扩增产物；（2）使用HRM分析技术和Tagman分析技术检测扩增产物中rs10119位点、rs71352238位点、rs429358位点及rs7412位点的基因型。