[发明专利]重组人乳头瘤病毒蛋白表达

权利要求书

1.一种分离的基因，其编码人乳头瘤主要衣壳蛋白L1，其特征在于，所述的基因具有毕赤酵母偏爱的密码子，所述基因的序列为SEQ ID NO:6所示核苷酸序列。

2.一种表达载体，所述的表达载体中含有权利要求1所述的基因的序列。

3.一种基因工程化的宿主细胞，所述的细胞含有权利要求2所述的表达载体，或其基因组中整合有权利要求1所述的基因。

4.如权利要求3所述的宿主细胞，其特征在于，所述的细胞是毕赤酵母细胞。

5.根据权利要求4所述的宿主细胞，其特征是，所述毕赤酵母选自毕赤酵母X-33、GS115、KM71和SMD1168菌株。

6.一种制备具有免疫原性的大分子的方法，该大分子的直径为50-80nm，由人乳头状瘤病毒主要衣壳蛋白L1自我装配而成，其特征在于，所述方法包括：

(1)培养权利要求3所述的宿主细胞，从而在宿主细胞内表达所述的人乳头状瘤病毒主要衣壳蛋白L1，并组装形成具有免疫原性的大分子；

(2)分离所述的具有免疫原性的大分子。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，在步骤(2)中包括：

(a)破碎步骤(1)获得的宿主细胞，获得含有具有免疫原性的大分子的上清液；和

(b)将步骤(a)获得的上清液依次采用离子交换柱层析和羟基磷灰石柱层析进行纯化，从而获得所述的具有免疫原性的大分子。

8.一种在毕赤酵母中表达HPV6L1基因的方法，包括下述步骤：

(1)将经密码子优化的HPV6L1基因克隆入表达载体中，所述基因的序列为SEQ ID NO:6所示核苷酸序列；

(2)将步骤(1)所得的表达载体转化至毕赤酵母菌株中；

(3)使用抗生素对步骤(2)所得的转化菌株进行筛选，获得生长情况最好的一个或多个菌株；

(4)通过测试HPV6L1基因的表达量对步骤(3)所得的菌株进行进一步筛选，获得表达量最高的一个或多个菌株；

(5)使用步骤(4)所得的菌株进行表达，获得HPV6L1蛋白。