[发明专利]一种红曲糯米中红斑素分离纯化的方法

说明书

本发明公开了一种红曲糯米中红斑素分离纯化的方法，包括以下步骤：（1）色素的提取；（2）样品液的制备；（3）硅胶柱层析；（4）浓缩：将收集到的颜色最深的红曲色素进行浓缩；（5）薄层层析；（6）刮取；（7）溶解、浓缩；（8）烘干。本发明红斑素分离纯化方法简化了硅胶柱层析和薄层色谱的洗脱液与展开剂的制备，减少了试剂的种类，同时简化了红曲色素分离纯化得到红斑素的工艺流程，提高了分离纯化效率。

技术领域

本发明属于红斑素分离纯化技术领域，尤其涉及一种红曲糯米中红斑素分离纯化的方法。

背景技术

红斑素是红曲色素中六大经典色素(黄色素：红曲素、安卡黄素；橙色素：红曲红素、红斑素；红色素：红曲红胺、红斑胺)之一。目前，国内外对红曲色素分离纯化主要有Lian,Wang和Guo等人先使用80孔/平方厘米的过滤膜将菌丝与滤液分离，再采用冻干法将滤液制成冻干粉制备出红曲色素粗提物，然后，用甲醇、乙酸乙酯、己烷直接从粗提物中按顺序洗涤提取出新的红色素，这一提纯过程步骤不多，但所用试剂种类相对较多，且未完全分离出单体。在2014年，Huang等人先采用超声提取法从红曲米中提取出了红曲色素粗提物(滤液)，再将滤液过膜、浓缩；然后，将样品液装载到装有200-300目硅胶的硅胶柱中，以正己烷和乙酸乙酯(7/3，v/v)为洗脱剂进行硅胶柱层析，得到初步分离的红曲色素；最后，以正己烷和乙酸乙酯(7/3，v/v)为展开剂，用薄层板(硅胶60目)进行薄层层析得到目标色素——两种橙色带黄色荧光的色素。Huang等人分离纯化取得两种橙色带黄色荧光色素的步骤较多，所用试剂种类多，且未将两种色素单独分开。2010年，郑允权等人采用高速逆流色谱法来分离纯化红曲色素组分，主要将含有嗜氮酮主体的六大经典色素进行分离。他们首先采用70％的乙醇从红曲米中超声提取红曲色素，操作步骤重复两遍，将所得萃取液合并后进行浓缩；然后，将浓缩后的色素粗提物进行高速逆流色谱分离，经过分析比较，高速逆流色谱所用溶剂体系A为正已烷-醋酸乙酯-甲醇-水(10：0：7.5：2.5，V/V)，溶剂体系B为正已烷-醋酸乙酯-甲醇-水(2.5：7.5：5：5，V/V)，取上层液为固定相，下层液作为流动相，根据色素不同出峰时间进行收集样品，红斑素在60分钟开始出峰；最后，用丙酮溶液进行析出，得到红斑素色素晶体。这种分离纯化步骤繁琐，耗时，使用试剂种类较多，单体样品中含杂质较多。

本发明涉及到的红斑素分离纯化方法主要基于Mukherjee等人从红曲中分离纯化方法，如图1所示，由流程图可知，该分离纯化工艺较为复杂，且存在所用试剂多样的问题。

发明内容

本发明目的就是为了弥补已有技术的缺陷，简化硅胶柱层析和薄层层析的洗脱液与展开剂的制备，减少所用试剂种类，节约试剂，提供一种红曲糯米中红斑素分离纯化的方法。

为了实现上述的目的，本发明提供以下技术方案：

一种红曲糯米中红斑素分离纯化的方法，包括以下步骤：

(1)色素的提取

将红曲糯米打成粉，称取红曲糯米粉与200倍质量的蒸馏水混合，打浆机打浆5分钟后放入超声波清洗槽内超声30分钟，取出，再次打浆5分钟后超声15分钟，取出，抽滤，取滤液；

(2)样品液的制备

将滤液以10000r/min的速度于离心机中离心30分钟，取上清液，将上清液浓缩至浸膏状，用20ml的色谱级甲醇进行溶解，制成样品液；

(3)硅胶柱层析

①硅胶的处理：取适量100-200目的柱层析硅胶于105℃下活化30min，取出后冷却至室温，再将其倒入干燥的烧杯中，加入适量色谱级甲醇溶解浸泡，浸泡时间为20min；