[发明专利]与叶绿体发育相关的CDA1蛋白的原核表达制备方法

权利要求书

1.一种与叶绿体发育相关的CDA1蛋白的原核表达制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)对CDA1蛋白的编码基因进行优化，优化后的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；

(2)将优化后的编码基因连入表达载体获得重组表达载体，然后将重组表达载体转入原核表达菌株中，获得工程菌，将工程菌培养至菌液A600OD值为0.5-0.6时，加入诱导剂继续培养10-14h；

(3)取加入诱导剂培养后的菌液，离心收集菌体，用收菌缓冲液悬浮菌体；破碎菌体的细胞，离心收集上清液；将上清液进行镍离子亲和层析柱分离，得到纯化后的CDA1蛋白。

2.根据权利要求1所述的原核表达制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述表达载体为PET-28a质粒。

3.根据权利要求1所述的原核表达制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述原核表达菌株为BL21(DE3)。

4.根据权利要求1所述的原核表达制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述诱导剂为IPTG，诱导剂加入后的终浓度为0.5mM。

5.根据权利要求1所述的原核表达制备方法，其特征在于，步骤(3)中，所述收菌缓冲液中含有500mM NaCl、20mM HepeS；所述收菌缓冲液的pH为7.0。

6.根据权利要求1所述的原核表达制备方法，其特征在于，步骤(3)中，将将上清液进行镍离子亲和层析柱分离的条件为：将上清液与镍介质在4℃条件下孵育2h，孵育结束后用25mM咪唑洗脱5-6次，每次洗脱后静置5min；然后用50mM咪唑洗脱3次，每次洗脱后静置3min；最后用500mM咪唑洗脱出目标蛋白。