[发明专利]一种用于DNA分离的磁珠分选液及其制备方法

说明书

本发明提供一种用于DNA分离的磁珠分选液，以51ml体积的该磁珠分选液计，包含1ml GE磁珠、5‑10g PEG、12.5‑50mg吐温20、50‑125mmol NaCl、0.25‑1mmol Tris、0.025‑0.1mmol EDTA和0.085‑0.34mmol HCl。本发明还提供制备该磁珠分选液的制备方法。该制备方法以GE磁珠为原料，包括GE磁珠清洗步骤和GE磁珠重悬步骤，具有操作简单、稳定、耗时短、成本低的优点。制得的磁珠分选液具有纯化DNA和片段化筛选的功能，能长期保持稳定，不需要进一步化学修饰，提高DNA分离纯化效率，可以替代进口磁珠，适用于大规模建库生产。

技术领域

本发明涉及生化检测领域，具体涉及一种用于DNA分离的磁珠分选液及其制备方法。

背景技术

磁珠包裹有四氧化三铁(Fe₃O₄)磁性物质，因此具有超顺磁性，对外加磁场有较强的磁响应性。分散在溶液中的磁珠在外加磁场作用下，会被吸附到溶液容器的内壁上，而当撤去磁场后，磁珠又重新均匀分散于溶液中。基于这个性质，可以采用磁珠结合溶液中的某种成分，然后通过外加磁场吸附分离磁珠来达到分离该成分的目的。

为了将磁珠用于结合DNA片段，在磁珠颗粒的表面上一般修饰有特异性的基团，如羧基、羟基等功能基团。这些功能基团能选择性地结合靶标核酸，然后通过外加磁场吸附收集磁珠，最后用无核酸酶的水(简称无酶水)或TE缓冲液洗脱实现靶标核酸的分离。用磁珠分离DNA的一般步骤是，首先将样本DNA裂解形成DNA片段，接着加入磁珠分选体系使磁珠与DNA片段结合，然后施加磁场使结合了DNA片段的磁珠分离出来，再加入洗脱液使DNA片段从磁珠上洗脱下来，最后将包含DNA片段的溶液转移到另一个容器，得到纯化的DNA片段。

磁珠分选体系主要包括磁珠、聚乙二醇(PEG)、盐离子(NaCl)等。以羧基磁珠的分选体系为例，羧基磁珠表面带负电荷，DNA具有水溶性，表面呈负电荷，盐离子具有水溶性。PEG、盐离子与DNA分子竞争性地与水分子相结合，导致DNA分子脱水，DNA构象发生改变，并逐渐聚集形成沉淀。在盐离子作用下，DNA的磷酸基团与磁珠上的羧基形成离子桥，使DNA吸附在磁珠表面。最后通过磁力吸附及洗脱实现DNA的分离。

就磁珠而言，目前NGS建库过程中使用的DNA分离磁珠主要有贝克曼XP磁珠和Kapa磁珠两种。这两种磁珠依靠进口，货期长，价格高，而且包装也不灵活，不利于自动化规模化建库生产。

发明内容

本发明的目的在于针对现有进口磁珠货期及成本方面的不足，提供一种用于DNA分离的磁珠分选液及其制备方法。该制备方法具有操作简单、稳定、耗时短、成本低的优点，制得的磁珠分选液能长期保持稳定，不需要进一步化学修饰，提高DNA分离纯化效率，可用于大规模建库生产。

具体地，本发明的目的通过以下技术方案来实现：

在第一方面，本发明提供一种用于DNA分离的磁珠分选液，以51ml体积的该磁珠分选液计，包含1ml GE磁珠、5-10g PEG、12.5-50mg吐温20、50-125mmol NaCl、0.25-1mmolTris、0.025-0.1mmol EDTA和0.085-0.34mmol HCl。

进一步地，该PEG为PEG4000、PEG6000或PEG8000。

在第二方面，本发明提供一种制备本发明第一方面的磁珠分选液的制备方法，该制备方法以GE磁珠为原料，包括以下步骤：

(1)GE磁珠清洗：用磁珠清洗液清洗该GE磁珠，其中该磁珠清洗液包含0.05体积％的吐温20和1mM Tris-HCl；