[发明专利]三重同时检测镰刀菌毒素的胶体金免疫层析试纸条、其制备方法和应用

说明书

本发明公开了三重同时检测镰刀菌毒素的胶体金免疫层析试纸条、其制备方法和应用，包括：将分别包被有ZEN‑BSA、DON‑BSA、FB1‑BSA的检测线和羊抗鼠IgG抗体的控制线的硝酸纤维素膜、喷涂有FB1、DON、ZEN的单克隆抗体‑胶体金颗粒标记物混合物的结合垫、样品垫和吸水垫按顺序依次粘贴于底板上，组装后切小条得到。本发明将三种镰刀菌毒素的检测整合在一个试纸条上，形成的多通道检测效率高，且所得试纸条特异性好、灵敏度高，操作简单，非专业人员也可使用，满足粮食储存销售机构、出入境检疫、海关、生产企业、监督部门等快速准确地判断FB1、DON和ZEN毒素具体含量的要求，便于基层推广和运用。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，是一种利用纳米金作为信号放大材料且同时检测镰刀菌毒素伏马毒素B1、脱氧雪腐镰刀菌烯醇和玉米赤霉烯酮的胶体金免疫层析试纸条、其制备方法和应用。

背景技术

真菌毒素是真菌生长过程中产生的代谢产物，被定为自然界存在的危险的食品污染物，常见的真菌毒素主要来源于曲霉菌属(Aspergillus)、青霉菌属(Penicillium)和镰刀菌属(Fusarium)，其中镰刀菌生长过程中会产生多种毒素，伏马菌素B1(Fumonisins B1,FB1)、脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivalenol,DON)和玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)均属于镰刀菌属毒素，其在自然界中广泛分布，特别是在谷物中可同时存在，主要污染玉米、小麦、大麦和燕麦等多种农作物及其制品。

不同的镰刀菌具有不同的理化性质和毒理作用，对和动物的健康都会造成一定的影响，可引起不同组织器官、免疫、神经、生殖系统的损伤。伏马菌素被国际癌症研究会划分到2B类-可能的人类致癌物，其中伏马菌素B1的毒性强且污染率高；脱氧雪腐镰刀菌烯醇主要具有细胞毒性、免疫毒性和生殖毒性等，且分急毒性和慢毒性，可引起呕吐、腹泻和发烧等症状；玉米赤霉烯酮毒素可引发人和动物的多种疾病，主要具有生殖毒性、免疫毒性、肝肾毒性和细胞毒性，同时玉米赤霉烯酮对内分泌系统、肿瘤细胞的产生也具有一定的影响，且其分布广泛、残留时间长、难处理，以及其他毒素一起具有增强毒性的现象。

目前，有关镰刀菌素的检测方法主要有两种：色谱法和免疫学方法。色谱法依靠昂贵的仪器和专业的操作人员，免疫学方法相对较简单，但也相对依赖专业人员的操作，免疫学方法中酶联免疫吸附试剂盒已经成功应用于市场中，但操作较复杂，时间较长，依赖专业操作人员和配套的仪器，不适合现场检测。

基于胶体金的免疫层析法能克服上述方法的不足，胶体金免疫层析法同样是利用抗原抗体反应的原理，单克隆抗体-胶体金标记示踪物与固定在硝酸纤维素膜上的抗原或抗体形成复合物被截留聚集而显色，不需要特定的酶和底物显色，也不需要抗原抗体之间的较长时间的物理吸附，简单又快速，仅需根据显色与否判定阴阳性结果，已成功应用于临床医学和食品安全领域，如早早孕检测试纸和瘦肉精检测试纸。但是，商品化的胶体金免疫层析试纸条绝大多数为单一检测，而同时检测三种镰刀菌毒素(FB1、DON和ZEN)的胶体金免疫层析试纸条尚未见报道。因此，从人畜的健康及食品安全的角度出发，建立一种快速、简单、灵敏、易推广的多重检测方法极为必要和迫切。

发明内容

本发明的目的在于提供一种同时快速检测伏马菌素B1、脱氧雪腐镰刀菌烯醇和玉米赤霉烯酮的胶体金免疫层析试纸条，该试纸条对FB1、DON和ZEN的特异性好，检测速度快，且简单易操作，非专业人员也可使用。

本发明的另一目的还在于提供上述胶体金免疫层析试纸条的制备方法，将三种毒素的检测整合在一个检测试纸条上，形成多通道检测，只需一次操作即可以同时检测三种毒素，减少使用单一检测方法检测三种毒素带来的人力、物力的损失，提高效率。

本发明的再一目的在于提供上述胶体金免疫层析试纸条的应用，用于谷物中FB1、DON和ZEN毒素含量的检测，满足粮食储存销售机构、出入境检疫、海关、生产企业和监督部门快速准确判断FB1、DON和ZEN毒素含量的要求，便于基层推广和运用。