[发明专利]非洲猪瘟病毒MGF-505R基因荧光PCR检测试剂、试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种非洲猪瘟病毒（ASFV）MGF‑505R基因荧光PCR检测试剂、试剂盒及其应用，属于病毒检测领域。本发明以MGF‑505R基因为参考，设计、优化出一对特异的PCR引物和一条TaqMan荧光探针，并以含有MGF‑505R基因序列的质粒作为阳性对照品进行标准曲线的制作，其方法分析敏感性可达到1.36个拷贝。利用本发明检测非洲猪瘟病毒及鉴别以MGF‑505R基因缺失的疫苗株与自然感染株，敏感度高，特异性强，适用于快速检测。

技术领域

本发明涉及病毒检测领域，具体地，涉及非洲猪瘟病毒MGF-505R基因荧光PCR检测试剂、试剂盒及其应用。

背景技术

非洲猪瘟(African swine fever，ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的猪的 一种烈性、出血性传染病。1921年Montgomery在非洲肯尼亚首先发现。ASFV病 毒有囊膜，直径175～215nm，核衣壳20面体对称。基因组由单分子线状双股DNA 组成，大小为170～190Kb，含有151～167个开放阅读框(ORFs)，其中约30％的 ORFs存在多个拷贝，即多基因家族，包括MGF100、MGF110、MGF300、MGF360、 MGF505/530和p22，不同分离毒株的ORFs拷贝数也各不相同，MGFs家族基因编 码的多个拷贝可能为病毒提供了选择进化的优势。MGFs基因作为免疫逃逸基因， 敲除后可降低毒力，增加宿主的免疫应答。Reis等(Reis A L,Abrams C C,Goatley L C.Deletion of African swine fever virus interferon inhibitors[J].Vaccine,2016,34 (39):4698-4705.)将构建的MGF530/505R和MGF360缺陷毒株BeninΔMGF免疫猪 后发现，能够100％抵御Benin97/1的攻击，而sanchez-Cordon等(S NCHEZ-CORDN P J,JABBAR T,BERREZAIE M.Evaluation of protection induced by immunisationof domes[J].Vaccine,2018,36(5):707-715.)研究结果最高保护率为83％，提示免疫 剂量、免疫方式等影响免疫保护效果。步志高等(步志高陈伟业赵东明等。基因 缺失的减毒非洲猪瘟病毒及其作为疫苗的应用。申请号：201910348878.7，中国农 业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)。)研究 了针对非洲猪瘟病毒MGF360/505R缺失和CD2V与MGF360/505R联合缺失的基 因缺失病毒两种疫苗株，均对非洲猪瘟中国流行强毒株产生100％免疫保护。