[发明专利]基于离心法的液基制片技术用于液基真菌的检测方法

权利要求书

1.一种基于离心法的液基制片技术用于液基真菌的检测方法，其特征在于，所述基于离心法的液基制片技术包括以下步骤：向含有真菌的标本的标本瓶内加入专用消化液，将瓶底呈倒锥体形的标本瓶放入振荡器振荡，静置，尖端朝下，比重较大的真菌沉淀于尖底部，振荡后用一次性移液管插入标本瓶底部，吸取1-2mL标本，加入至制片仓内，制片仓安装在装有载玻片的制片架上，将制片架悬挂入离心式液基细胞制片机内，离心，制成液基薄片；

所述专用消化液由以下原料制备而成：pH为8的PBS缓冲液、胰蛋白酶、EDTA二钠、碳酸氢钠和二硫苏糖醇；

所述专用消化液的制备方法：将胰蛋白酶、EDTA二钠、二硫苏糖醇溶于pH为8的PBS缓冲液中，加入碳酸氢钠调节pH为8.3，搅拌溶解，制得专用消化液。

2.根据权利要求1所述一种基于离心法的液基制片技术用于液基真菌的检测方法，其特征在于，所述专用消化液由以下原料按重量份制备而成：pH为8的PBS缓冲液1000-1200份、胰蛋白酶30-100份、EDTA二钠10-30份、碳酸氢钠适量和二硫苏糖醇10-20份。

3.根据权利要求2所述一种基于离心法的液基制片技术用于液基真菌的检测方法，其特征在于，所述专用消化液由以下原料按重量份制备而成：pH为8的PBS缓冲液1100份、胰蛋白酶70份、EDTA二钠20份、碳酸氢钠适量和二硫苏糖醇15份。

4.根据权利要求1所述一种基于离心法的液基制片技术用于液基真菌的检测方法，其特征在于，所述标本和专用消化液的体积比为1:1。

5.根据权利要求1所述一种基于离心法的液基制片技术用于液基真菌的检测方法，其特征在于，所述振荡时间为5-10min(，所述静置时间为10-30min；所述离心转速为800-1000r/min，离心时间为3-5min。

6.根据权利要求1所述一种基于离心法的液基制片技术用于液基真菌的检测方法，其特征在于，所述检测方法为在所述液基薄片制备好后，进行固定、染色、封片，置于荧光显微镜下进行镜检。

7.根据权利要求8所述一种基于离心法的液基制片技术用于液基真菌的检测方法，其特征在于，所述染色步骤采用专用染色剂，所述专用染色剂由以下原料按重量份制备而成：苯酚5-12份、乙二醇20-40份、PBS缓冲液100-200份、藻蓝蛋白或藻红蛋白30-50份和去离子水100-200份。

8.一种如权利要求1-3任一项权利要求所述的专用消化液。

9.一种如权利要求8所述的专用染色剂。