[发明专利]抗猪繁殖与呼吸综合征病毒介导肺损伤的miRNA和应用

说明书

本发明公开了一种抗猪繁殖与呼吸综合征病毒介导肺损伤的miRNA和应用；所述miRNA为mir‑331‑3p，其核苷酸序列为SEQ ID NO:1。mir‑331‑3p能够通过直接靶向PRRSV基因组中的ORF1b以及通过靶向宿主免疫关键基因TNF‑α抑制PRRSV复制及其介导的肺损伤；构建的mir‑331‑3p重组质粒pEGFP‑N1‑mir‑331‑3p在细胞水平和活体水平上对PRRSV的复制及其介导的肺损伤均有抑制作用。本发明为猪繁殖与呼吸综合征(PRRSV)的防控和药物、疫苗的制备提供了新的质粒资源。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)介导肺损伤的miRNA及其应用。

背景技术

猪繁殖与呼吸综合症(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome，PRRS)常导致仔猪呼吸困难和成年母猪流产、早产、木乃伊胎等情况，由于发病后其常常导致猪耳部与腹部皮肤出现蓝紫色斑点，故又称“蓝耳病”(Terpstra et al,1991,Nelsen etal,1999)。PRRS是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染引起。PRRSV属于小动脉病毒科，基因组长度约为15kb，由9个开放阅读框(ORFs)组成(Dea et al,2000)。在这9个ORFs中，ORF1a和ORF1b约占病毒基因组的75％，它们编码的蛋白具有明显的复制酶和聚合酶活性(Tang et al,2016,Bautista et al,2002)。有报道称ORF1a和ORF1b的结合是病毒负链RNA合成的关键。体内外实验表明ORF1b与HP-PRRSV的毒力和复制效率直接相关(Li et al,2014)。

猪肺泡巨噬细胞(PAMs)是PRRSV的主要靶细胞，是感染过程中病毒复制的主要部位(Lawson et al,1997,Molitor et al,1997)。PAMs也是PRRSV的主要免疫细胞，为宿主提供第一防御。PRRSV在感染宿主后可存活250天(Wills et al)。PRRSV持续感染可导致肺损伤，主要表现为弥漫性炎症损伤，最终导致一系列炎症级联反应(Grommes et al,2003)。肺损伤会导致免疫系统的破坏。研究报道PRRSV与其他病毒或细菌共感染是很常见的，这也许就是PRRS有很高的死亡率的原因之一(chen et al,2019)。

目前PRRS主要通过疫苗进行免疫预防，然而，目前使用的PRRS疫苗均存在一定程度的缺陷，灭活苗在灭活过程中造成抗原表位的缺失或抗原性减弱，不能产生足够的免疫保护，常导致免疫失败(Nielsen et al 1997)。而减毒疫苗虽可以很好地刺激机体产生细胞免疫和体液免疫，但PRRSV弱毒株会出现返强现象，造成苗毒散播(Storgaard et al1999)。此外，PRRSV本身容易重组变异，现有疫苗并不能很好地控制病毒在宿主体内的复制，尤其是对高致病性毒株的免疫效果有限。

微小RNA(Micro RNA)，即miRNA，属于一类长约23nt的内源性、非编码RNA，其主要的功能是发挥基因调控作用。越来越多的证据表明，miRNAs参与了病毒介导的肺损伤等多个生命过程(Zhang et al,2011)。因此，鉴定对PRRSV介导的肺损伤有显著抑制作用的miRNA，有助于建立miRNA新疗法，应用于PRRSV等病毒的防治。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供了一种抗猪繁殖与呼吸综合征病毒介导肺损伤的miRNA和应用。该miRNA为mir-331-3p，mir-331-3p通过靶向TNF-α参与对肺损伤的调节；mir-331-3p和含有mir-331-3p重组质粒能够抗猪繁殖与呼吸综合征疾病和该疾病导致的肺损伤，该猪繁殖与呼吸综合征疾病是指猪群发生以繁殖障碍和呼吸系统症状为特征的一种急性、高度传染的病毒性传染病。

为实现上述目的，本发明鉴定了一种抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)介导肺损伤的miRNA，所述miRNA为mir-331-3p，其核苷酸序列为SEQ ID NO:1。