[发明专利]一种检测牛冠状病毒BCV的检测试剂盒及使用方法

权利要求书

1.一种用于检测牛冠状病毒BCV的检测试剂盒，其特征在于盒内包括有扩增引物SEQID NO.3和SEQ ID NO.4。

2.根据权利要求所述1的用于检测牛冠状病毒的检测试剂盒，其特征在于试剂盒内还有引物SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2。

3.根据权利要求所述1或2的用于检测牛冠状病毒BCV的检测试剂盒，其特征在于试剂盒内还有纳米金属粒子的PCR缓冲液、Taq DNA聚合酶。

4.根据权利要求3所述的用于检测牛冠状病毒BCV的检测试剂盒，其特征在于含有纳米金属粒子的PCR缓冲液为NPK02。

5.一种非疾病诊断目的使用权利要求1至3所述的任一试剂盒的方法，其特征在于：提取待检样本中病毒的RNA，并将RNA反转录为cDNA得到扩增模板，将扩增模板用扩增引物SEQID NO.3和SEQ ID NO.4进行PCR扩增，PCR产物用琼脂糖电泳检测，根据电泳图中是否出现特定条带确定待检样本是否带有牛冠状病毒。

6.根据权利要求5所述的非疾病诊断目的使用检测牛冠状病毒BCV的检测试剂盒方法，其特征是PCR时的反应体系为：

2×nano PCRBuffer 12.5Μl，

引物P3/P4(10μM)0.8μL，

pET-28a-N(+)1.0μL，

Taq DNA聚合酶(5U/μL)0.5μL，

ddH₂O补至总体系25.0μL。

反应条件为：

95℃、5min；

35个循环：95℃、30s，51℃、30s，72℃、30s；

72℃、10min。