[发明专利]抗CTLA-4纳米抗体及其应用

说明书

本发明涉及一种抗CTLA‑4纳米抗体及其应用。所提供的抗CTLA‑4纳米抗体选自下列至少之一：(1)具有GFTLSSSA所示的CDR1、ISSFGIT所示的CDR2和ARRPYWSRSWIY所示的CDR3；(2)与(1)相比，具有至少一个保守氨基酸取代。所提供的抗CTLA‑4纳米抗体与CTLA‑4胞外段的结合能力强，可以用于肿瘤的诊断和治疗。

技术领域

本发明涉及医药生物学和生物制药技术领域，具体涉及一种抗CTLA-4纳米抗体及其应用。

背景技术

免疫检查点(immune checkpoint)在机体的特异性免疫过程中，主要调节T细胞介导的免疫反应。机体受到肿瘤侵袭时，肿瘤细胞通过异常上调抑制性共刺激分子及其配体表达，抑制T细胞发挥功能，有利于肿瘤细胞的生长和逃逸。细胞毒T淋巴细胞相关抗原4(cytotoxic T lymphocyte-associated antigen-4,CTLA-4)是一种白细胞分化抗原，是T细胞上的一种跨膜抑制性共受体。CTLA-4与T细胞刺激协同B7家族分子结合后诱导T细胞无反应性，参与免疫反应的负调节。而且CTLA-4也在调节性T细胞(Tregs)中发现并有助于它们的抑制功能。CTLA-4的配体在许多实体瘤中存在高度表达的水平。当这些配体与T细胞上的CTLA-4结合后下调T细胞的免疫应答，从而使得肿瘤细胞逃逸免疫系统的识别和杀伤作用。因此CTLA-4是肿瘤免疫治疗的重要靶点。目前多使用抗CTLA-4抗体用于肿瘤治疗，这些抗体都是传统的抗体分子，分子量大，需要在动物细胞中进行表达生产。因而具有生产成本高，在体内可能会导致免疫原性等缺点。

小分子纳米抗体由于具有分子质量小，体积小，无Fc段等性质，使它们在很多方面的表现优于传统抗体，免疫原性低，它们不易产生自身免疫反应；有很强的组织渗透性；易于结合隐蔽的抗原表位；可用微生物进行生产，且生产成本低等优势。

然后抗CTLA-4纳米抗体还需要进一步改进。

发明内容

本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本发明的一个目的在于提出一种抗CTL-4纳米抗体及其应用。

我们抽取骆驼外周血构建噬菌体文库，从中筛选获得抗CTLA-4纳米抗体，并将其在大肠杆菌和酵母中进行表达。所获得的抗CTLA-4纳米抗体分子量小，特异性强，与CTLA-4胞外段的结合能力强，因而可以用于CTLA-4高表达的肿瘤的诊断和治疗。

为此，本发明提供了如下技术方案：

在本发明的第一方面，本发明提供了一种抗CTLA-4纳米抗体，所述纳米抗体选自下列至少之一：(1)具有GFTLSSSA所示的CDR1、ISSFGIT所示的CDR2和ARRPYWSRSWIY所示的CDR3；(2)与(1)相比，具有至少一个保守氨基酸取代。所提供的抗CTLA-4纳米抗体分子量小，特异性强，与CTLA-4胞外段的结合能力强，可以用于肿瘤的诊断和治疗，尤其是用于CTLA-4高表达的肿瘤的诊断和治疗。

根据本发明的实施例，以上所述的纳米抗体具有如下所示的氨基酸序列：(a)SEQID NO:1所示的氨基酸序列；(b)与(a)相比，具有至少一个保守氨基酸取代。

在本发明的第二方面，本发明提供了一种核酸，所述核酸包含编码本发明第一方面所述的纳米抗体的核酸序列。

根据本发明的实施例，以上所述的核酸还可以进一步包括如下技术特征：

根据本发明的实施例，所述核酸包含如下所示的核酸序列：SEQ ID NO:2所示的核酸序列；与SEQ ID NO:2所示的核酸序列相比，至少具有95％以上同源性的序列，优选具有98％以上同源性的序列，更优选具有99％以上同源性的序列。

在本发明的第三方面，本发明提供了一种表达载体，所述表达载体包含本发明第二方面所述的核酸。