[发明专利]一种定量检测抗环胍氨酸多肽抗体的检测方法及试剂盒

说明书

本发明涉及一种用于定量检测抗环胍氨酸多肽抗体的检测方法及试剂盒。本发明采用一种胶乳增强竞争比浊的方法，即通过待测样本中抗环瓜氨酸多肽抗体与试剂中包被抗体的胶乳微球竞争结合试剂中环胍氨酸多肽，在500～700nm波长分光光度法测定其吸光度值，根据吸光度值衰减量计算待测样本中抗环胍氨酸抗体浓度值。采用该方法测定抗环胍氨酸抗体的线性范围可达到7～500U/L。且不受类风湿等干扰，试剂检测性能可达到ELISA和电化学发光免疫分析法一致。本发明的方法的检测试剂盒灵敏度高，特异性好，适用于临床化学分析仪，同时大大降低了检测成本。

技术领域

本发明涉及用于定量检测抗环胍氨酸多肽抗体的检测方法及试剂盒。属于生物医学检测领域。

背景技术

抗环瓜氨酸肽抗体(anticyclic peptide containing citrullin)是以合成的环化瓜氨酸多肽(CCP)为抗原的自身抗体，抗CCP抗体的检测对类风湿关节炎(RA)的诊断有高度的特异性，并可用于RA的早期诊断。一般认为抗CCP抗体对RA诊断敏感性为50％～78％，特异性为96％，早期患者RA阳性率可达80％。此外，抗CCP抗体不仅是RA早期诊断诊断指标，还是鉴别侵袭性和非侵袭性RA的灵敏指标。其抗体阳性患者比抗体阴性的患者易发展更严重的关节骨质破坏。但也有数个研究报道显示CCP抗体对RA的敏感度在40％～50％，不及类风湿因子(RF)。联合检测RF和CCP抗体，将明显提高诊断的敏感度(陆永绥，张伟民主编；郦卫星副主编；黄东胜主审。临床检验管理与技术规程下，第2版[M].2014)。

目前临床检测抗环胍氨酸多肽(CCP)抗体主要方法为酶联免疫吸附(ELISA)法和电化学发光免疫分析(罗氏产品)法，主要采用的是合成含有经修饰的精氨酸残基的环胍氨酸肽(CCP)作为抗原，由于CCP可以大量人工合成，因此用于RA早期诊断具有很高的临床价值和研究背景。本发明采用的胶乳增强免疫竞争比浊的方法，通过待测抗CCP抗体与试剂中检测抗CCP抗体竞争结合CCP抗原达到定量测定待测样本中抗CCP抗体的浓度，适用于临床化学分析仪，同时大大降低了检测成本，且试剂检测性能可达到ELISA和电化学发光免疫分析法一致。

发明内容

本发明的目的在于提供一种低成本，使用简便，并且可以精确测定抗CCP抗体的检测方法，测定用试剂和测定用试剂盒。

本发明采用的技术方案为：

1.本发明所述一种定量检测抗环胍氨酸多肽抗体的检测方法，其特征在于该方法采用的是待测样本与检测试剂1混合后，待测样本中抗环胍氨酸抗体与试剂1中环胍氨酸多肽或连接有载体的环胍氨酸多肽发生免疫复合反应，待加入试剂2后，其包被有抗CCP抗体的胶乳微球与剩余环胍氨酸多肽或连接有载体的环胍氨酸多肽发生免疫复合反应而使胶乳微球聚集形成浊度，在500～700nm波长条件下，其吸光度值随待测样本中抗环胍氨酸抗体浓度值升高而降低，根据其吸光度值降低多少可计算出待测样本中抗环胍氨酸抗体浓度。

2.本发明所述抗CCP抗体的检测方法，其特征在于将所述的试剂1和试剂2装配成定量检测抗环胍氨酸多肽抗体的检测试剂盒，所述：

试剂1的配方为：缓冲液1～100mM，增浊剂0.01％～5％，中性盐0.1％～1％，稳定剂1％～20％，CCP-载体0.01％～1％，防腐剂0.01％；

试剂2的配方为：缓冲液1～100mM，中性盐0.1％～1.0％，稳定剂1％～-20％，抗CCP抗体包被微球0.1％～-0.4％，防腐剂0.01％。

3.本发明所述抗CCP抗体的检测方法，其特征在于所述的试剂1中采用了环胍氨酸多肽或连接有载体的环胍氨酸多肽；

所述连接有载体的环胍氨酸多肽(CCP-载体)，其载体主要采用各种蛋白、多肽、聚丙烯酸、聚乙二醇(PEG)，聚吡咯烷酮(PVP)和聚苯乙烯微球；