[发明专利]同时靶向BCMA和CD38的嵌合抗原受体及其应用

说明书

本发明涉及医药生物领域，尤其涉及一种同时靶向BCMA和CD38的嵌合抗原受体及其制备方法；本发明公开了一种针对多发性骨髓瘤细胞表面BCMA和CD38双靶点的嵌合抗原受体的构建与应用。本发明以BCMA抗原和CD38的空间表位为靶点，将BCMA抗体的scfv区，CD38抗体的scfv区，CD8的跨膜区，4‑1BB胞内信号区，CD3zeta胞内信号区，进行串联，构建的嵌合抗原受体用于治疗多发性骨髓瘤，以解决CAR‑T细胞疗法在在治疗多发性骨髓瘤中的高复发问题；有效治疗多发性骨髓瘤瘤，并为多发性骨髓瘤复发/转移的有效防治提供新策略。

技术领域

本发明涉及医药生物技术，尤其涉及一种同时靶向BCMA和CD38的嵌合抗原受体及应用。

背景技术

多发性骨髓瘤(MM)，是以骨髓中浆细胞异常增殖为特征的恶性“克隆性疾病”，仅有25％的患者接受化疗后生存期在5年以上；在血液学恶性肿瘤中，其发病率仅次于非霍奇金淋巴瘤，是第三大常见血液肿瘤，全世界每年新增病例约114,000例；自1959-2017年，针对多发性骨髓瘤已上市20款药物，主要集中于蛋白酶抑制剂、免疫调节剂，这些新的治疗手段使MM患者的生存率有了很大的提高。然而值得关注的是，大部分的MM患者经过多次治疗后,依旧会出现复发；故更为安全有效的药物，仍为临床急需。

BCMA(B-cell maturation antigen)是B细胞成熟抗原，由185个氨基酸残基组成的III型跨膜蛋白，属TNF受体超家族，其配体属于TNF超家族，如增殖诱导配体(APRIL)B淋巴细胞刺激因子(BAFF)，BCMA与其配体结合后，可激活B细胞的增殖和存活。BCMA特异高表达于浆细胞和多发性骨髓瘤细胞表面，而在造血干细胞和其他正常组织细胞中均不表达，因此，BCMA可以作为MM的靶向性治疗的理想靶点。

目前以BCMA为靶点的抗体主要有CA8(专利：US 20140105915A1)；C11D5.3、C12A3.2(专利：WO 2010104949A2)；J22.9-xi(PDB：4ZFO)；13A4(专利：WO 2014122143)，实验数据显示这些抗体与BCMA有很好的结合，并可以很有效地阻断配体与受体的结合，在体外对BCMA高表达的细胞有很强的结合率，以及抑制由BAFF和APIRL诱导引起的增殖抑制作用，同时临床前荷瘤鼠模型中均显示出很好肿瘤细胞清除率，其中以鼠源抗体CA8为基础设计的ADC药物(J6M0-mcMMAF)进入临床治疗阶段。Nitya S等设计出了以C11D5.3为基础的，通过化学偶联得到的BCMA、CS1双特异性Fab抗体，发现其对多发性骨髓瘤细胞有更强的抑制作用。

CD38分子是单链Ⅱ型跨膜糖蛋白，催化环腺苷二磷酸核糖的合成和降解，参与钙动员，与受体调节的黏附作用密切相关。所有多发性骨髓瘤细胞均高表达，正常情况下在一些非造血组织的淋巴细胞、骨髓细胞相对低表达.Kong等证明了新型鼠抗人CD38单抗daratumumab可通过补体介导细胞毒作用(CDC)或抗体依赖性细胞毒作用在无论骨髓基质细胞是否存在的条件下杀伤CD38+骨髓瘤细胞。另外，结合daratumumab和抗免疫球蛋白G抗体可诱导骨髓瘤细胞凋亡。鼠多发性骨髓瘤模型研究发现，雷利度胺预处理瘤细胞，daratumumab的抗体依赖性细胞毒作用杀伤作用加强.

嵌合抗原受体(CAR)是模拟T细胞受体功能的人工受体，其融合了抗原与抗体或配体与受体的识别和结合特异性以及效应T细胞对被识别的肿瘤细胞的杀伤能力。CAR由CD8a引导肽、抗原识别区(配体或单链抗体或Fab片段)、跨膜区、以及T细胞的一系列信号转导区(CD28，CD3，CD137胞内信号传导结构域)依次连接而成。T细胞经修饰后，表面表达的CAR首先通过抗原识别区与肿瘤细胞表面抗原结合，然后通过其信号转导区将活化信号传递至胞内，靶向地激活T细胞对肿瘤细胞杀伤活性。将表达CAR的DNA序列克隆入慢病毒表达载体，并感染从患者血中分离出的T细胞，使T细胞表面表达相应的CAR，再将此修饰的T细胞再输回患者体内，修饰后的T细胞可以在患者体内靶向性地杀伤表达相关抗原的肿瘤细胞，达到清除肿瘤细胞的效果。