[发明专利]人源化转基因动物

权利要求书

1.一种制备包含人IL-17A基因的序列的转基因非人动物的方法，其中所述方法包括在所述动物的基因组中插入人IL-17A基因的序列，所述转基因非人动物表达人IL-17A蛋白，其中所述人IL-17A基因的序列替换所述动物的基因组中对应的内源性序列，所述人IL-17A基因的序列为SEQ ID NO:7；其中所述动物是小鼠；其中所述方法包括：

a.提供重组载体；

b1.将所述重组载体注射到小鼠的受精卵中；

c1.通过将所述受精卵移植到代孕母鼠中并繁殖从而获得所述转基因小鼠；或者

b2.将重组载体导入到小鼠的胚胎干细胞中；

c2.通过所述胚胎干细胞的克隆获得所述转基因小鼠；其中所述重组载体包含SEQ IDNO:7的人IL-17A基因和小鼠IL-17A基因上游和下游同源臂序列，所述载体用于替换小鼠基因组中对应的内源性基因序列；

其中所述小鼠IL-17A基因上游同源臂序列是SEQ ID NO:5，且所述下游同源臂序列是SEQ ID NO:6。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述方法还包括对所述代孕母鼠繁殖的后代进行检测以筛选其基因组中包含人IL-17A基因序列的转基因小鼠的步骤。

3.如权利要求1或2所述的方法，其中所述方法还包括通过所述转基因小鼠的杂交以获得对所述人IL-17A基因的序列纯合的小鼠的步骤。

4.如权利要求1或2所述的方法，其中将所述胚胎干细胞导入分离的囊胚中，并将获得的嵌合囊胚移植到代孕母鼠中，通过繁殖获得所述转基因小鼠。

5.如权利要求1或2所述的方法，其中所述重组载体还包含用于阳性筛选的抗性基因。

6.如权利要求5所述的方法，其中所述抗性基因是新霉素磷酸转移酶的编码序列。

7.如权利要求1或2所述的方法，其中所述重组载体还包含用于负筛选的标记基因，其中所述标记基因是白喉毒素A亚基的编码序列。

8.一种制备包含人IL-17A基因的序列和人IL-17RA基因的序列的转基因小鼠的方法，其中所述人IL-17A基因的序列为SEQ ID NO:7，所述人IL-17RA基因的序列为SEQ ID NO:35，所述方法包括权利要求1-7中任一项的方法，从而获得包含人IL-17A基因的序列的转基因非人小鼠，并且将该转基因小鼠与如下的方法获得的包含人IL-17RA基因的序列的转基因小鼠进行杂交，

所述获得包含人IL-17RA基因的转基因小鼠的方法包括在所述小鼠的基因组中插入人IL-17RA基因的序列，所述转基因非人动物表达人IL-17RA蛋白，其中所述人IL-17RA基因的序列替换所述动物的基因组中对应的内源性序列；

其中所述获得包含人IL-17RA基因的序列的转基因小鼠的方法包括：

a.提供重组载体，该重组载体包含SEQ ID NO:35的人IL-17RA基因和小鼠IL-17RA基因上游和下游同源臂序列；其中所述小鼠IL-17RA基因上游同源臂序列是SEQ ID NO:33，且所述下游同源臂序列是SEQ ID NO:34；

b1.将所述重组载体注射到小鼠的受精卵中；

c1.通过将所述受精卵移植到代孕母鼠中并繁殖从而获得所述转基因小鼠；或者

b2.将所述重组载体导入到小鼠的胚胎干细胞中；

c2.通过所述胚胎干细胞的克隆获得所述转基因小鼠。

9.如权利要求8所述的方法，其中所述获得包含人IL-17RA基因的序列的转基因小鼠的方法包括还包括对所述代孕母鼠繁殖的后代进行检测以筛选其基因组中包含人IL-17RA基因的序列的转基因小鼠的步骤。

10.如权利要求8或9所述的方法，其中所述获得包含人IL-17RA基因的序列的转基因小鼠的方法包括还包括通过所述转基因小鼠的杂交以获得对所述人IL-17RA基因的序列纯合的小鼠的步骤。