[发明专利]基于小檗碱募集LRSAM 1降解BCR-ABL1的治疗慢性粒细胞白血病的试剂盒

说明书

本发明公开了一种基于募集LRSAM1降解BCR‑ABL1融合蛋白的治疗慢性粒细胞白血病的试剂盒，所述试剂盒含有高表达LRSAM1基因的重组载体；所述LRSAM1基因的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.1所示。本发明首次发现小檗碱处理后，LRSAM1参与到小檗碱诱导的BCR‑ABL1蛋白的自噬降解中，LRSAM1的高表达直接导致BCR‑ABL1蛋白表达量的降低。这为治疗慢性粒细胞白血病提供新的思路，本发明提供了一种含有高表达LRSAM1基因的重组载体的试剂盒，该重组载体转入慢性粒细胞白血病细胞后，能有效低降低BCR‑ABL1蛋白表达量，并促进BCR‑ABL1蛋白的自噬降解，起到治疗效果。

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种基于募集LRSAM 1降解 BCR-ABL1融合蛋白的治疗慢性粒细胞白血病(CML)的试剂盒。

背景技术

慢性粒细胞白血病(CML)是BCR-ABL1癌基因转化原始造血细胞的结果。 BCR/ABL癌基因表达量的激增和BCR-ABL1融合蛋白的高活性是慢性粒细胞白血病的重要体现。

在先申请CN105616409B和CN107823205A公开了小檗碱(BBR)通过促使BCR-ABL1融合蛋白降解进而治疗CML的报道。然而，上述两份专利对于 BBR促使融合蛋白降解的深入的分子机制并未做深入地研究。

发明内容

为了对治疗CML提供新的途径，本发明的目的在于提供一种基于募集 LRSAM 1降解BCR-ABL1融合蛋白的治疗慢性粒细胞白血病的试剂盒，该试剂盒含有高表达LRSAM1的重组载体，LRSAM1降解BCR-ABL1融合蛋白，达到治疗CML的目的。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种治疗慢性粒细胞白血病的试剂盒，该试剂盒含有高表达LRSAM1基因的重组载体；

所述LRSAM1基因的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.1所示；

在先前专利(CN105616409B和CN107823205A)研究的基础上，本发明发现BBR通过自噬溶酶体途径募集LRSAM 1降解BCR-ABL1融合蛋白。因此，向白血病细胞中转入高表达LRSAM1的重组载体，是治疗慢性粒细胞白血病慢性粒细胞白血病的新策略。

所述高表达LRSAM1的重组载体，是将LRSAM1基因的核苷酸序列重组于表达载体上得到；

所述的表达载体为易锦生物Lv203载体；

所述的高表达LRSAM1的重组载体，通过以下步骤得到：

(1)在LRSAM1的核苷酸序列的5'端加上NdeI酶切位点，在3'端加上BamHI 酶切位点，得到含有NdeI和BamHI双酶切位点的序列；

(2)利用NdeI和BamHI限制性内切酶分别双酶切步骤(1)最终得到的序列以及表达载体；双酶切后的序列与双酶切后的表达载体连接，得到高表达 LRSAM1的重组载体。

将试剂盒中的高表达LRSAM1的重组载体按照lipo3000试剂说明书对重组载体进行转化，转化入慢性粒细胞白血病细胞中并使用嘌呤霉素进行筛选，高表达的LRSAM1降解BCR-ABL1融合蛋白，达到治疗慢性粒细胞白血病的目的；

所述的慢性粒细胞白血病细胞是K562、KCL22或BaF3-P210中的一种以上。

本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：