[发明专利]抗炎五肽及其提取分离方法和在改善记忆中的应用

说明书

本发明公开了一种抗炎五肽及其提取分离方法和在改善记忆中的应用，该抗炎五肽的氨基酸序列为Ala‑Pro‑Thr‑Leu‑Trp，其提取分离方法包括以下步骤：碱溶酸沉从核桃粕中提取核桃蛋白，取核桃蛋白，加去离子水混合，酶解，取上清液，得到核桃蛋白酶解液；使用3kDa分子量超滤膜收集透过液；核桃蛋白酶解液的低分子量组分上样凝胶过滤色谱柱，用去离子水洗脱，检测波长为220nm，收集合并成多个洗脱峰组分，选择抗炎活性较强的组分做质谱检测，证实含有本发明的抗炎五肽。本发明的抗炎五肽对LPS刺激的BV‑2细胞炎症反应具有较好的抑制活性，可用于制备改善记忆类药物或改善记忆类保健品。

技术领域

本发明属于活性肽领域，具体涉及一种抗炎五肽及其提取分离方法和在改善记忆中的应用。

背景技术

小胶质细胞是中枢神经系统(CNS)的常驻巨噬细胞，在先天免疫调节和神经元稳态中起关键作用。但在大脑神经炎症状态下，活化的小胶质细胞诱导促炎介质的释放，包括一氧化氮(NO)，前列腺素E₂(PGE₂)和促炎细胞因子，例如白介素-1β(IL-1β)，白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等。它们在神经退行性疾病中起关键作用。作为主要的细胞因子，IL-1β在控制先天性和适应性免疫反应中具有重要作用。它可以增强其他促炎细胞因子如TNF-a和IL-6的表达。IL-1β的过量产生还刺激小胶质细胞产生和释放活性氧(ROS)，同时，ROS通过激活NF-κB途径诱导促炎基因的表达。激活的促炎性转录因子可增强细胞因子和趋化因子的形成，从而加速炎症反应的产生和发展。反之，该过程又会产生更多的ROS。这种恶性循环通过介导线粒体功能障碍，加剧细胞损伤并最终对神经元产生有害影响。这表明氧化应激在神经炎症发展中的重要作用。

BV-2是一种永生化的小鼠小胶质细胞，由于其激活后可持续、稳定和过量地产生炎性因子，因此被广泛应用于研究炎症相关的神经退行性疾病。脂多糖(LPS)是革兰氏阴性菌外膜的主要成分，可通过介导多种细胞反应促进炎症因子的释放，通常用于在体内外诱导炎症的发生。

研究表明可通过在小鼠腹膜内注射LPS从而促进炎症反应进程来造成学习和记忆功能障碍模型。此外，越来越多的研究报道了氧化应激在炎症反应发展中的作用。ROS的产生会增加BV-2小胶质细胞中炎症介质的表达，从而加速神经元损伤和死亡。据报道，小胶质细胞中ROS的过量产生可引起炎症并导致神经系统损伤。作为细胞中ROS的主要来源，线粒体的功能变化也参与其中。

发明内容

本发明的首要目的在于提供一种抗炎五肽。

本发明的另一目的在于提供上述抗炎五肽的提取分离方法。

本发明的再一目的在于提供上述抗炎五肽的用途。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种五肽，其氨基酸序列为Ala-Pro-Thr-Leu-Trp(APTLW)。

上述五肽可以采用现有技术化学合成。例如通过固相合成仪合成本发明五肽，将二氯树脂溶胀、洗涤，脱除Fmoc保护基后加入氨基酸进行缩合反应，重复脱除-保护-缩合的过程直至所有氨基酸连接完毕。

此外本发明的抗炎五肽也可采用超滤和葡聚糖凝胶色谱等分离手段从核桃蛋白酶解液中分离获得，具体地包括以下步骤：

(1)采用碱溶酸沉的方法从核桃粕中提取核桃蛋白，具体流程如下，核桃粕打粉后加水溶解(物料比为1:12)，溶液调pH值至8.0-9.0，搅拌2-3h，离心(8000-10000rpm，10-15min，4℃)，取上清液调pH值至4.0-5.0，再搅拌2-3h，再次离心(8000-10000rpm，10-15min，4℃)，将沉淀溶解，透析脱盐2d(渣与水1:5)以上，真空干燥得到核桃蛋白粉；