[发明专利]具有抗真菌和清除自由基活性的环酪-异亮-亮-色-苏肽及制备方法

说明书

本发明涉及具有抗真菌活性和清除自由基活性的环酪‑异亮‑亮‑色‑苏肽（Tyr‑Ile‑Leu‑Trp‑Thr环肽）及制备方法，属于生物制品的提取制备技术领域。所述环酪‑异亮‑亮‑色‑苏肽是由酪氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、色氨酸和苏氨酸，以酰胺键连接而成的十五元环状五肽。这是一个新化合物，尚无文献报道。该化合物可通过培养蛙粪霉，然后提取分离得到。环酪‑异亮‑亮‑色‑苏肽纯品为白色粉末，对DPPH自由基的半数清除浓度（DC₅₀）为：0.82 mg/mL，在200μg/mL的浓度下对白色链珠菌的抑菌圈直径为11.36 mm。该化合物具有制备抗菌药物和抗氧化抗衰老保健品的潜力。

技术领域

本发明属于生物制品的提取制备技术领域，涉及具有抗真菌和自由基清除活性的环酪-异亮-亮-色-苏肽（Tyr-Ile-Leu-Trp-Thr环肽）提取和纯化。

背景技术

环酪-异亮-亮-色-苏肽是从一种蛙粪霉(Basidiobolussp. )培养物中分离制备得到的具有抗真菌和清除自由基活性的生物活性物质。

蛙粪霉(Basidiobolussp. )为虫霉目蛙粪霉科蛙粪霉属的真菌；在我国常见的有蛙生蛙粪霉、固孢蛙粪霉和裂孢蛙粪霉等。上述菌种可从土壤和两栖类动物粪便中分离得到。

抗真菌活性：有多种真菌是条件致病菌，当人们抵抗力下降时容易感染，特别是老人和病人容易发生真菌感染。目前世界老龄化日趋严重，同时由于环境污染等因素，人们的抵抗力呈下降趋势，真菌感染病例呈上升趋势，同时早期抗真菌药已出现耐药现象，因此开发新型抗真菌活性物质非常有意义。

清除自由基活性：自由基（free radical），从化学结构上看是指含未配对电子的基团、原子或分子。自由基具有高度化学活性。对于生命体来说，自由基是生命活动中多种生化反应的中间产物。在正常情况下，人体内的自由基是处于产生与清除的动态平衡之中。自由基是机体有效的防御系统，如不能维持一定水平的自由基则会对机体生命活动带来不利影响。但自由基产生过多或清除过慢，它通过攻击生命大分子物质及各种细胞器，会造成机体分子水平、细胞水平及组织器官水平的各种损伤，加速机体的衰老进程并诱发各种疾病。最新的研究表明，人类的衰老及许多疾病都与自由基损伤有关。具有清除自由基活性的物质能与自由基反应并使之还原成非自由基化合物，可清除机体代谢过程中产生的过多的自由基，是一种可增进人体健康的重要活性物质。自由基清除剂在非生命体系中有抗氧化作用，能够有效地阻止物质的氧化败坏，对于延长物品的保质期有着重要作用，被广泛用于食品、药品、日用化学品等中。

发明内容

为寻找新型天然高效的具有抗真菌活性和清除自由基活性的物质，发明人通过对中国的100余株昆虫病原真菌代谢物进行活性研究，发现了从一种蛙粪霉中提取的环酪-异亮-亮-色-苏肽具有很强的抗白色链珠菌活性和清除自由基活性的作用。

具有抗真菌和清除自由基活性的环酪-异亮-亮-色-苏肽的结构式如下：

所述环酪-异亮-亮-色-苏肽是由酪氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、色氨酸和苏氨酸，以酰胺键连接而成的十五元环状五肽；

所述环酪-异亮-亮-色-苏肽具有清除自由基活性和抗白色链珠菌的活性；对二苯基苦基苯肼自由基（DPPH）的半数清除浓度（DC₅₀）为：0.82mg/mL；在200 μg /mL的浓度下对白色链珠菌的抑菌圈直径为11.36mm。

具有抗真菌和清除自由基活性的环酪-异亮-亮-色-苏肽的制备操作步骤如下：

（1）菌种培养

将蛙粪霉（Basidiobolussp.）经过斜面菌种培养、二级液体种子培养、三级液体种子培养和四级培养，得到液体的最终发酵物或固体的最终发酵物；