[发明专利]检测甜椒叶脉斑驳病毒的PCR引物组、试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种检测甜椒叶脉斑驳病毒的PCR引物组，其特征在于，包括3条甜椒叶脉斑驳病毒核内含体蛋白b基因特异引物与2条茄果类植物内参基因Actin特异引物，其中3条甜椒叶脉斑驳病毒核内含体蛋白b基因特异引物分别为PVMV-F1、PVMV-F310和PVMV-R824，2条茄果类植物内参基因Actin特异引物为PeActin-F1和PeActin-R1093，具体如下：

PVMV-F1：AGGTGTGTAAATGATTTCGGC，如SEQ ID NO.1所示；

PVMV-F310:TGTGAATGTCCTCGTCTTG，如SEQ ID NO.2所示；

PVMV-R824：GAAAAAGTGAGAGCCAGTTAGT，如SEQ ID NO.3所示；

PeActin-F1:GTGACAATGGAACAGGAATG，如SEQ ID NO.4所示；

PeActin-R1093:CACTTCCGGTGGACAATG，如SEQ ID NO.5所示。

2.一种包含如权利要求1所述引物组的试剂或试剂盒。

3.一种采用如权利要求1所述的引物组检测甜椒叶脉斑驳病毒的PCR检测方法，其特征在于，包括以下操作步骤：

(1)取待测样品，提取其总RNA，反转录为cDNA；

(2)采用所述引物组，以待测样品cDNA为模板进行PCR反应，获得扩增产物；

(3)1.0％～1.5％琼脂糖电泳检测2～5μL扩增产物，若出现1093bp以及824bp且出现515bp条带，则表示样品cDNA可用且含有PVMV病毒；若仅出现1093bp条带，则表示样品cDNA可用，但未检测到PVMV病毒；若不出现任何条带，则表示样品cDNA不可用。

4.根据权利要求3所述的PCR检测方法，其特征在于，所述PCR反应的 体系中引物反应方式为：

甜椒叶脉斑驳病毒核内含体蛋白b基因特异引物组PVMV-F1、PVMV-F310、PVMV-R824为组合检测PVMV；茄果类植物内参引物组PeActin-F1、PeActin-R1093检测样品中cDNA质量；初检引物组：甜椒叶脉斑驳病毒核内含体蛋白b基因特异引物组PVMV-F1、PVMV-R824以及内参引物PeActin-F1、PeActin-R1093为初检组合，同时检测样品PVMV与cDNA合成质量；复检引物组：甜椒叶脉斑驳病毒核内含体蛋白b基因特异引物PVMV-F310、PVMV-R824为复检引物组排除假阳性。

5.根据权利要求4所述的PCR检测方法，其特征在于，所述初检的 PCR反应体系和反应条件为：初检PCR反应体系20μL，为：2×Taq PCR Mix反应液10μL、cDNA模板1μL、PVMV核内含体蛋白b基因特异上、下游引物各0.5μL、内参基因Actin特异上、下引物各1.0μL，加ddH ₂O补至总体积20μL；

初检PCR反应条件：94℃预变性2min；30个循环参数为：94℃变性30s，52℃退火30s，72℃延伸45s；最后72℃5min。

6.根据权利要求4所述的PCR检测方法，其特征在于，所述复检的 PCR反应体系和反应条件为：复检PCR反应体系20μL，为：2×Taq PCR Mix反应液10μL、cDNA模板1μL、PVMV核内含体蛋白b基因特异上、下游引物各1.0μL，加ddH ₂O补至总体积20μL；

复检PCR反应条件：94℃预变性2min；30个循环参数为：94℃变性30s，51℃退火30s，72℃延伸20s；最后72℃5min。

7.根据权利要求1所述的引物组或含有该引物组的试剂盒在检测甜椒叶脉斑驳病毒中的应用。