[发明专利]一种混菌发酵提高几丁质脱乙酰基酶产量的方法

说明书

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种混菌发酵提高几丁质脱乙酰基酶产量的方法。该方法是在马红球菌CGMCC No.14861(产酶菌株)发酵过程中添加表皮葡萄球菌ATCC12228(伴生菌株)进行混菌发酵，每mL发酵液酶活力可达2996.2U。较产酶菌株单菌发酵，发酵产酶提高20.2倍，相比现有技术，利用发明提供的混菌发酵工艺，可实现快速地积累几丁质脱乙酰基酶，达到高产的效果，具有广泛的工业应用前景。

技术领域：

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种混菌发酵提高几丁质脱乙酰基酶产量的方法。

背景技术：

几丁质又名几丁质，学名为(1，4)-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-葡聚糖，是自然界生物所含有的一种含量仅次于纤维素的氨基多糖，主要存在于无脊椎动物，如虾、昆虫、海藻、真菌及酵母中。但是几丁质不溶于水、酸、碱和有机溶剂，所以其没有太大的商业价值，而其脱去乙酰基后的产物壳聚糖则广泛应用于医药、食品、化工、化妆品等行业。目前生产壳聚糖主要使用的化学法存在诸多问题，例如，反应时间长、能耗大、产品质量不稳定，特别是排放物会造成巨大的环境污染。

几丁质脱乙酰酶可以脱掉几丁质上的乙酰基生产脱乙酰度稳定、分子质量分布范围窄的壳聚糖产品，为解决化学法生产壳聚糖存在的问题提供了一条新的途径。目前国内外关于几丁质脱乙酰酶产生菌的研究仅有少量的文献报道，微生物来源的几丁质脱乙酰酶也主要以真菌为主，细菌较少。而且目前因微生物发酵生产几丁质脱乙酰基酶存在发酵时间长、酶产量低等一系列问题，该酶一直未能实现产业化。因此，开发一种可提高几丁质脱乙酰基酶产量的方法具有重要的意义和应用价值。

发明内容：

针对现有技术的不足，本发明旨在提供一种混菌发酵提高几丁质脱乙酰基酶产量的方法。本发明提供的高产几丁质脱乙酰基酶的方法是在马红球菌CGMCC No.14861(产酶菌株)发酵过程中添加表皮葡萄球菌ATCC12228(伴生菌株)进行混菌发酵，获得发酵产酶量提高20倍的发酵工艺，易于大规模培养及产业化应用。

本发明提供的一种采用马红球菌CGMCC No.14861与伴生菌表皮葡萄球菌ATCC12228混菌发酵高产几丁质脱乙酰基酶的生产方法，具体如下：

(1)种子培养(产酶菌与伴生菌在同样的种子培养条件下进行分别培养)：

培养条件：搅拌转速为160-200rpm，温度为30-37℃，发酵12-24h；

种子培养基：蛋白胨5-10g/L、酵母浸粉3-8g/L、氯化钠5-10g/L、pH6.0-7.0；

(2)发酵培养

发酵条件：将分别培养完成的产酶菌与伴生菌种子液按照1：0.2-4的混合比例混合后接种发酵；接种量2-10％，搅拌转速为160-200rpm，温度为30-40℃，发酵24-48h；

发酵培养基：酵母浸粉5-10g/L，葡萄糖0.5-2.0g/L，硫酸镁1.0g/L，磷酸二氢钾0.3g/L，磷酸氢二钾1.0g/L，氯化钠0.5-2.0g/L，pH6.0-7.0；

发酵24-48h后，发酵液中的几丁质脱乙酰基酶含量达到1782.03-2996.2U/mL。

有益效果：

本发明提供的混菌发酵工艺能够利用普通碳源和氮源，快速进行细胞培养并大量积累几丁质脱乙酰基酶。36h发酵产酶可达到稳定期，每mL发酵液酶活力为2996.2U。较产酶菌株单菌发酵，发酵产酶提高20.2倍，相比现有技术，利用发明提供的混菌发酵工艺，可实现快速地积累几丁质脱乙酰基酶，达到高产的效果，具有广泛的工业应用前景。

附图说明：

图1混菌比例1:1发酵产酶曲线；

图2不同混菌比例的发酵产酶曲线。

具体实施方式：