[发明专利]一种用于分离临床样本中的糖基化外泌体的凝集素-磁性载体偶联复合物有效
| 申请号： | 202010060055.7 | 申请日： | 2020-01-19 |
| 公开（公告）号： | CN111253491B | 公开（公告）日： | 2022-03-25 |
| 发明（设计）人： | 林长青;陈天圣;郝昆;黄鹤;高琦;李艳召;许智慧;郄霜;赵广珍 | 申请（专利权）人： | 北京尧景基因技术有限公司 |
| 主分类号： | C07K17/10 | 分类号： | C07K17/10;C07K17/08;G01N33/68;G01N33/569 |
| 代理公司： | 北京悦和知识产权代理有限公司 11714 | 代理人： | 司丽春 |
| 地址： | 102600 北京市大兴区中关村科技园区大*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用于 分离 临床 样本 中的 化外 凝集素 磁性 载体 复合物 | ||
1.一种糖基化外泌体分离组合物，其特征在于，所述糖基化外泌体分离组合物包括：凝集素-磁性载体偶联复合物、清洗液和洗脱液：
所述凝集素-磁性载体偶联复合物包括：磁性载体；和偶联在磁性载体外侧的凝集素；其中：
所述凝集素包括：木菠萝凝集素、花生凝集素、豌豆凝集素、刀豆凝集素、小扁豆凝集素、麦胚素、大豆凝集素、芸豆凝集素、蜗牛凝集素中的任意一种或者两种及以上；
所述磁性载体包括：葡聚糖磁珠、琼脂糖磁珠、树脂或环氧树脂磁珠、聚苯乙烯磁珠中的任意一种或者两种及以上；
所述清洗液为无金属盐离子的清洗缓冲液或纯化水，用于清洗去除分离过程中非特异性结合的、未发生糖基化的外泌体及其他杂质；
所述洗脱液为溶有糖的硼酸盐缓冲液，用于洗脱特异性结合在凝集素-磁性载体偶联复合物上的糖基化外泌体，使洗脱后的外泌体外观形态完整，无破损或裂解。
2.根据权利要求1所述糖基化外泌体分离组合物，其特征在于，所述凝集素包括：木菠萝凝集素、花生凝集素、刀豆凝集素、小扁豆凝集素、麦胚素、大豆凝集素、芸豆凝集素中的任意一种或者两种及以上。
3.根据权利要求1所述糖基化外泌体分离组合物，其特征在于，所述凝集素为小扁豆凝集素。
4.根据权利要求1所述糖基化外泌体分离组合物，其特征在于，所述磁性载体粒径分布范围为1μm-200μm。
5.根据权利要求1所述糖基化外泌体分离组合物，其特征在于，所述磁性载体粒径分布范围为10μm-200μm。
6.根据权利要求1所述糖基化外泌体分离组合物，其特征在于，所述磁性载体粒径分布范围为30μm-150μm。
7.根据权利要求1所述糖基化外泌体分离组合物，其特征在于，所述凝集素-磁性载体偶联复合物中，每1ml磁性载体上偶联有1-20mg凝集素。
8.根据权利要求1所述糖基化外泌体分离组合物，其特征在于，所述凝集素-磁性载体偶联复合物中，每1ml磁性载体上偶联有5-15mg凝集素。
9.根据权利要求1所述糖基化外泌体分离组合物，其特征在于，所述凝集素-磁性载体偶联复合物中，每1ml磁性载体上偶联有10-15mg凝集素。
10.根据权利要求1所述糖基化外泌体分离组合物，其特征在于，所述糖基化外泌体包括：N-糖基化外泌体、O-糖基化外泌体、岩藻糖基化外泌体中的任意一种或两种及以上。
11.根据权利要求1-10任一所述的糖基化外泌体分离组合物，其特征在于，所述清洗液为pH值7.6±0.2的无金属盐离子的清洗缓冲液。
12.根据权利要求1-10任一所述的糖基化外泌体分离组合物，其特征在于，所述洗脱液为硼酸盐-甘露糖缓冲液。
13.根据权利要求12所述的糖基化外泌体分离组合物，其特征在于，所述硼酸盐-甘露糖缓冲液包括10-20mM的硼酸盐缓冲液和溶于其中的100-500mM 的甘露糖。
14.根据权利要求1-10任一所述的糖基化外泌体分离组合物，其特征在于，所述洗脱液为pH值6 .5±0 .2的硼酸盐-甘露糖缓冲液。
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