[发明专利]一种齿叶冬青体细胞胚胎直接发生和植株再生的方法

权利要求书

1.一种齿叶冬青体细胞胚胎直接发生和植株再生的方法，其特征在于，所述方法包括：

步骤1、采集齿叶冬青的未成熟种子，清洗消毒后，剥出幼胚作为外植体备用；

步骤2、将所得幼胚接种至体细胞胚诱导培养基上暗培养，获得体细胞胚，所述体细胞胚诱导培养基包括1/4MS、0.05～0.2mg/L 6-BA、1.3～1.7mg/L 2，4-D、50～70g/L蔗糖、6.2～6.7mg/L琼脂；

步骤3、将所得的体细胞胚转移至MS培养基上萌发培养，然后转移至光照条件下培养至形成生根的完整植株；

步骤4、将所得生根的完整植株移栽至栽培基质中培养。

2.如权利要求1所述的齿叶冬青体细胞胚胎直接发生和植株再生的方法，其特征在于，所述步骤1中清洗消毒的具体步骤为：将冬青的未成熟种子用流水冲洗10～30min，转移至超净工作台上用无菌水润洗；种子的表面消毒先用75％的酒精浸泡5～30min，再用8％次氯酸钠浸泡10～30min，最后用无菌水冲洗5-6次，放入无菌水中待用。

3.如权利要求1所述的齿叶冬青体细胞胚胎直接发生和植株再生的方法，其特征在于，所述步骤2中暗培养时间为25～35天。

4.如权利要求1所述的齿叶冬青体细胞胚胎直接发生和植株再生的方法，其特征在于，所述体细胞胚诱导培养基包括1/4MS、0.1mg/L 6-BA、1.5mg/L 2，4-D、60g/L蔗糖、6.5mg/L琼脂。

5.如权利要求1所述的齿叶冬青体细胞胚胎直接发生和植株再生的方法，其特征在于，所述步骤3中体细胞胚转移至MS培养基上萌发培养时间为12～16天，萌发培养于暗环境下进行。

6.如权利要求1所述的齿叶冬青体细胞胚胎直接发生和植株再生的方法，其特征在于，所述步骤3中转移至光照条件下培养的时间为26～30天。

7.如权利要求1所述的齿叶冬青体细胞胚胎直接发生和植株再生的方法，其特征在于，所述步骤3中光照条件下培养的温度为25±1℃，光照强度为1000-3000Lx，光照时间为16～18h/d。

8.如权利要求1所述的齿叶冬青体细胞胚胎直接发生和植株再生的方法，其特征在于，所述步骤4中移栽至栽培基质中置于温室苗床上喷雾系统下生长。