[发明专利]一种积雪草苷元的制备方法

说明书

本发明属于中药技术领域，具体涉及一种积雪草苷元的制备方法。本发明提供的积雪草苷的酶解方法收率及纯度均显著高于酸碱水解法，并且对设备要求低，具有环境污染小、无环境压力等优点，为中药积雪草的活性物质研究及开发提供了有效方法。

背景技术

本发明属于中药技术领域，具体涉及一种积雪草苷元的制备方法。

背景技术

积雪草(Centellaasiatica)为伞形科积雪草属植物，作为传统药用植物在我国有着悠久的历史以及广泛的应用，成分多为三萜类化合物，其中积雪草苷(asiaticoside,AT)以其药理活性丰富，临床作用广泛，成为积雪草中的主要活性成分，应用前景大，极具有开发价值。近年来，大量的研究证实AT具有抗肿瘤、抗静脉机能不全、抗溃疡、促创伤愈合、抗抑郁以及恢复神经功能等多种药理活性，同时还显现出在心血管、免疫调节、抗炎、抗病毒等方面的药理作用。

积雪草苷、羟基积雪草苷、积雪草苷B等为主要皂苷类活性成分，杨玉琴发现羟基积雪草苷血浆中的原型药物的最高浓度约为8ng/kg，此时具明显的促进烫伤伤口愈合作用，但体外试验却表明8ng/kg的羟基积雪草苷并无明显的促进伤口愈合的活性，由此开展了积雪草皂苷大鼠体内和体外的代谢情况研究，得出积雪草皂苷在体内肠道微生物的作用下，皂苷糖基逐渐被水解，最后转化为苷元，证明积雪草皂苷真正发挥药理活性的成分为低糖取代皂苷以及苷元。然而，积雪草中积雪草苷的含量为25mg/g，但积雪草酸含量仅为1mg/g，远远低于苷类成分。

目前，积雪草酸制备方法主要是从积雪草原草中直接提取，经过繁琐的萃取、层析等分离纯化过程而获得，较为费时费力，而且消耗大量溶剂。如上所述，积雪草中的积雪草酸含量并不高，从积雪草中直接获得的积雪草酸的量相对较少，而积雪草苷的含量大大高于积雪草酸，且积雪草苷的分离纯化方法比较成熟，相对简单，因此，寻找一种由积雪草苷获得积雪草酸的方法将有利于促进积雪草活性物质研究及开发。现阶段主要用到的方法为酸碱水解法。如中国专利2008101631725公开了一种碱水解制备积雪草酸的方法；200810163173X公开了一种酸水解制备积雪草酸的方法；2008101641820公开了一种碱水解制备羟基积雪草酸的方法；2008101642132公开了一种酸水解制备羟基积雪草酸的方法。

迄今为止未见有酶解法制备积雪草酸或羟基积雪草酸的报道。

发明内容

本发明主要的目的是提供一种高效获得积雪草酸的方法，此目的是通过如下技术方案实现的：

一种积雪草苷的酶解方法，包括如下步骤：

(1)酶解反应：将积雪草苷加入缓冲液中，加入水解酶，30℃-60℃反应12-120h；

(2)抽滤：将步骤(1)中的反应液抽滤，弃滤液，滤饼用无水乙醇溶解，积雪草苷与无水乙醇的重量体积比为1：25，对溶解液进行抽滤，滤液保留，所得滤饼重复上述操作一次，合并两次滤液；

(3)析晶：将步骤(2)中所得滤液浓缩至饱和，加水析晶至醇含量10％-30％，并对析晶液进行抽滤，弃滤液，滤饼80℃烘干，称重计算收率，高效液相测所得产品纯度。

步骤(1)中所述的缓冲液由水、乙酸与乙酸钠组成，PH为3.0-6.0，优选为5.0。

步骤(1)中所述的水解酶为蜗牛酶、柚苷酶、纤维素酶或橙皮苷酶，优选为蜗牛酶；

所述的反应温度为30℃-60℃，优选为40℃-50℃，最优为45℃；

所述的反应时间为12-120小时，优选为50-100小时，最优为84小时；

反应体系中积雪草苷与酶的比例为1:1/8-1:8，优选为1:4；

反应体系中积雪草苷的浓度为1g/L-20g/L，优选为10g/L。