[发明专利]猪Delta冠状病毒病毒样颗粒及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种猪Delta冠状病毒结构蛋白基因，其特征在于：其包括结构蛋白S基因、结构蛋白E基因、结构蛋白M基因和结构蛋白N基因并分别进行扩增；

所述结构蛋白S基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；

所述结构蛋白E基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；

所述结构蛋白M基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；

所述结构蛋白N基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；

所述扩增时，结构蛋白S基因的核苷酸序列的正向引物序列如SEQ ID NO.5所示；反向引物序列如SEQ ID NO.6所示；

结构蛋白E基因的核苷酸序列的正向引物序列如SEQ ID NO.7所示；反向引物序列如SEQ ID NO.8所示；

结构蛋白M基因的核苷酸序列的正向引物序列如SEQ ID NO.9所示；反向引物序列如SEQ ID NO.10所示；

结构蛋白N基因的核苷酸序列的正向引物序列如SEQ ID NO.11所示；反向引物序列如SEQ ID NO.12所示。

2.根据权利要求1所述的猪Delta冠状病毒结构蛋白基因，其特征在于：克隆结构蛋白S基因、结构蛋白M基因和结构蛋白N基因的核苷酸序列时，起始密码子ATG前设有EcoRⅠ酶切位点序列，终止密码子后设有HindIII酶切位点序列；

克隆结构蛋白E基因的核苷酸序列时，起始密码子ATG前设有XhoI酶切位点序列，终止密码子后设有KpnI酶切位点序列。

3.一种重组穿梭质粒，其特征在于：其包括权利要求1或2所述的猪Delta冠状病毒结构蛋白基因。

4.一种重组杆粒，其特征在于：其包括权利要求3所述的重组穿梭质粒。

5.一种重组杆状病毒，其特征在于：其包括权利要求4所述的重组杆粒。

6.一种猪Delta冠状病毒病毒样颗粒，其特征在于：其由权利要求5所述的重组杆状病毒感染Sf9细胞纯化制得。

7.一种如权利要求6所述的猪Delta冠状病毒病毒样颗粒的制备方法，其特征在于：其包括如下步骤：

(1)、设计并扩增猪Delta冠状病毒结构蛋白基因；

(2)、构建包括步骤(1)的猪Delta冠状病毒结构蛋白基因的重组穿梭质粒；

(3)、构建包括步骤(2)的重组穿梭质粒的重组杆粒；

(4)、将步骤(3)的重组杆粒感染Sf9细胞，得到重组杆状病毒；

(5)、将步骤(4)的重组杆状病毒感染Sf9细胞，纯化得到猪Delta冠状病毒病毒样颗粒。

8.一种如权利要求6所述的猪Delta冠状病毒病毒样颗粒在制备预防猪Delta冠状病毒引起的猪腹泻疾病疫苗中的应用。