[发明专利]一种抗猪流行性腹泻病毒的抗体制备及应用

说明书

本发明公开了一种抗猪流行性腹泻病毒的抗体制备及应用。本发明提供的抗猪流行性腹泻病毒的抗体的基因是由重链和轻链组成；重链的氨基酸序列如序列表的序列2所示；轻链的氨基酸序列如序列表的序列4所示。本发明提供的抗猪流行性腹泻病毒的抗体可以抑制猪流行性腹泻病毒，在预防和/或治疗猪流行性腹泻中具有重要的应用价值。

技术领域

本发明涉及一种抗猪流行性腹泻病毒的抗体制备及应用。尤其涉及该抗体制备制备及用于预防和/或治疗猪流行性腹泻病毒引起的疾病的药物中的应用，属于生物技术领域。

背景技术

猪流行性腹泻(Porcine Epidemic Diarrhea，PED)是由猪流行性腹泻病毒(Porcine Epidemic Diarrhea Virus，PEDV)引起的仔猪和育肥猪的一种急性肠道传染病，其与传染性胃肠炎很相似，在我国多发生在每年12月份至翌年1～2月，夏季也有发病的报道。PEDV属于冠状病毒科，冠状病毒属。目前还没有发现PEDV有不同的血清型。PEDV经口和鼻感染后，直接进入小肠。通过免疫荧光和电子显微镜检查，PEDV的复制在小肠和结肠绒毛上皮细胞浆中进行，其它脏器内未发现PEDV增殖。PEDV增殖首先造成细胞器的损伤，继而出现细胞功能障碍。肠绒毛萎缩，造成了吸收表面积的减少，小肠黏膜碱性磷酸酶含量显著减少进而引起营养物质吸收障碍，这是引起腹泻的主要原因，属于渗透性腹泻。严重腹泻引起脱水是导致病猪死亡的主要原因。

猪流行性腹泻只发生于猪，各种年龄的猪都能感染发病。哺乳猪、架子猪或肥育猪的发病率很高，尤以哺乳猪受害最为严重，母猪发病率变动很大，约为15％～90％。病猪是主要传染源。PEDV存在于肠绒毛上皮细胞和肠系膜淋巴结，随粪便排出后，因污染环境、饲料、饮水、交通工具及用具等而传染。主要感染途径是消化道，如果一个猪场陆续有不少窝仔猪出生或断奶，PEDV会不断感染失去母源抗体的断奶仔猪，使PED呈地方流行性，在这种繁殖场内，猪流行性腹泻可造成5～8周龄仔猪的断奶期顽固性腹泻。

疫苗是预防PED的主要途径，但是经常会出现免疫失败的问题，尤其是哺乳母猪发病，会引起PED在猪场流行。抗体法是清除PEDV的主要方法，也是治疗发病猪的最重要手段。具有完善翻译后修饰功能是哺乳动物细胞被选作大多数生物药蛋白表达宿主的主因。大肠杆菌BL21是用于外源抗体基因表达最为成功的宿主细菌，已有越来越多的抗体蛋白在其中获得了高效表达，该系统表达的人用重组抗体蛋白药物已上市。与其它表达系统相比表达产物高，成本低廉，适合动物经济实惠。

IgG类的免疫球蛋白是血液中最丰富的蛋白质，它们的半衰期可高达21天，而FC片段是IgG保持体内较长半衰期的主要原因，同时具有稳定蛋白的作用。

发明内容

本发明的目的是提供一种抗猪流行性腹泻病毒的抗体，在预防和/或治疗猪流行性腹泻制品中应用。

本发明的技术方案

1.本发明所述一种抗猪流行性腹泻病毒的抗体，其特征在于该抗体基因序列包括重链(序列2)和轻链(序列4)。

2.本发明所述一种抗猪流行性腹泻病毒的抗体，其特征在于该抗体基因序列编码的核酸分子由所述重链的编码基因和所述轻链的编码基因组成；

所述重链的3.本发明所述一种抗猪流行性腹泻病毒的抗体，其特征在于编码基因如序列1自5’末端起第1至1335位所示；所述轻链的编码基因如序列3所示。该抗体的制备是分别构建获得的表达序列2所示蛋白的重组质粒PED-L和表达序列4所示蛋白得到的重组质粒PED-H一起重组到重组PET32NdeI-XHOI框，得到同时表达重链和轻链的原核双表达载体，转入大肠杆菌BL21，经的高密度发酵获得抗猪流行性腹泻病毒的猪源化克隆抗体。

4.本发明所述一种抗猪流行性腹泻病毒的抗体，其特征在于所述抗体基因序列或/和所述核酸分子在制备用于抑制猪流行性腹泻病毒的药物中的应用。