[发明专利]乙醇非氧化代谢物乙基葡萄糖醛酸苷和硫酸乙酯的制备方法

说明书

本发明涉及乙醇非氧化代谢物乙基葡萄糖醛酸苷和硫酸乙酯的制备方法，属于化合物制备领域。本发明采用葡萄糖醛酸内酯为基本的反应原料，经过三乙酰基溴葡萄糖醛酸甲酯中间体，在超声、水浴加热等条件下反应即可得到乙醇非氧化代谢物乙基葡萄糖醛酸苷，使该制备方法具有环境因素要求低，操作简单、易于实现的优点；另外本发明以无水乙醇和硫酸为原料，经过加热、过滤、沉淀、水浴挥干等操作得到乙醇非氧化代谢物硫酸乙酯，具有原料来源广泛、环境因素要求低，操作简单、易于实现的优点。

技术领域

本发明属于化合物制备领域领域，具体涉及乙醇非氧化代谢物乙基葡萄糖醛酸苷和硫酸乙酯的制备方法。

背景技术

乙醇，俗称酒精，是世界性的一大滥用物质。司法鉴定实践中，在交通事故、怀疑中毒的自杀、他杀案件，尤其是涉及死亡的案件中，需要对血液中的酒精的浓度(BloodAlcohol Concentration,BAC)进行分析和阐述，其检测结果往往是判定当事人责任的关键性证据。研究显示，乙醇入体后，会生成4类非氧化代谢物，包括乙基葡萄糖醛酸酯(EtG)、乙基硫酸酯(EtS)、脂肪酸乙酯(FAEE)和磷脂酰乙醇(PEth)，它们具有极高的专属性和特异性，被认为是乙醇摄入的重要生物标志物。而通过检测全血中乙醇的这些非氧化代谢物将有望解决上述两个难题(酒后逃逸案件BAC的检测和尸体血液中乙醇的来源问题)。

由于乙醇的4类非氧化代谢物的理化性质差别大，目前已有报道的分析方法，仅仅针对于一类或两类代谢物的检测。事实上，乙醇的4类非氧化代谢物具有不同的检测时限，且在尸体检材中的稳定性也有所差异，如EtG和EtS是目前受到关注最多的两类代谢物，它们在血液中的检测时限大于18h，其作为酒精标志物具有很高的灵敏度和专属性；FAEE具有细胞毒性，检测时限长达24h，研究认为酒精中毒及酒精引起的相关疾病均与其含量及毒性密切相关；PEth为乙醇存在情况下细胞膜合成时产生的特异性物质，饮酒后一周仍可检测到PEth，且对于长期饮酒者其检测时限更长，并且，根据其含量可对单次饮酒与长期饮酒进行区分。

本发明采用化学合成的方法对乙醇的两种非氧化代谢物——乙基葡萄糖醛酸苷和硫酸乙酯进行合成。通过该方法合成的两种物质产率与纯度较低，通过方法优化提高了硫酸乙酯的纯度和产率，但缺乏两种物质的提纯方法。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的之一在于提供乙醇非氧化代谢物乙基葡萄糖醛酸苷的制备方法；本发明的目的之二在于提供乙醇非氧化代谢物硫酸乙酯的制备方法。

为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

1、乙醇非氧化代谢物乙基葡萄糖醛酸苷的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：

(1)合成BGAME原料：按照15～18:150～250:0.2～0.5，g:ml:g的质量体积比将葡萄糖醛酸内酯、甲醇和甲醇钠混合，超声至完全溶解后静置，40℃下水浴加热至溶剂完全挥发，加入乙酸酐使其溶解，再加入含高氯酸的乙酸酐溶液，室温下过夜，加入0.1ml高氯酸，混合均匀后在-20℃冰箱中过夜，析出晶体，过滤后用乙醚洗涤后即可得到BGAME原料；

(2)合成BGAME：将步骤(1)中制备得到的BGAME原料和溴化氢乙酸混合，-20℃冰箱中过夜，40℃下水浴加热至溶剂完全挥发，加入氯仿，用体积比为1:1的冷饱和碳酸氢钠溶液和纯水混合溶剂进行萃取，静置后收集下层溶液，加入无水硫酸钠干燥后过滤，在40℃下水浴加热挥干溶剂得到残余物，加入乙醇溶解后过滤，滤去不溶物后再去除乙醇即可得到BGAME；

(3)合成乙基葡萄糖醛酸苷：将步骤(2)中制备得到的BGAME与苯、无水乙醇混合，加热至沸腾后再加入碳酸银，搅拌，室温过夜；离心后收集溴化物沉淀，40℃挥干，再加入无水甲醇和甲醇钠，搅拌，室温过夜，水浴挥干；再加入氢氧化钡溶液，超声并缓慢滴加质量分数为7～10％的草酸溶液至PH＝6，离心后40℃挥干，再滴加甲醇至完全溶解，滴加乙醚，形成白色沉淀即为乙基葡萄糖醛酸苷。